铁富萍，李 春，刘永林

（青海省海晏县畜牧兽医站，海晏 812200）

绵羊弓形虫病的ELISA诊断

铁富萍，李 春，刘永林

（青海省海晏县畜牧兽医站，海晏 812200）

弓形体病（toxoplasmosis）又名弓形虫病或弓浆虫病，是由刚地弓形虫（toxoplasme gondii）引起的人畜共患的寄生虫病，其病原体是一种专性细胞内寄生的致病原虫，在自然界广泛分布，寄主范围广，可感染人和猪、马、牛、羊、狗、猫等多种动物，其临床表现多样，从无症状隐形到亚临床到显性、重症以致死亡，主要侵害幼畜和新生仔畜，羔羊发病后常表现为免疫力低下、生长缓慢、消瘦、贫血以及呼吸系统和神经系统症状，严重时可引起死亡，怀孕母羊感染后常引起广泛病变而导致流产、不孕、死胎［1］，造成繁殖障碍。为了摸清青海省海晏县羊群中弓形体病的感染情况，我们于2009年8月，应用ELISA方法进行了弓形虫的抗体检测，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 抗原 P30由日本国家原生动物疾病研究控制中心提供，青海省畜牧兽医科学院兽医所生物技术研究室保存。P30简介如下：编码T.gondii的表面抗原l（SAGl，P30）被克隆到PGEX-4T-3质粒上，再表达在E.coli上。

1.2 被检血清的采集和处理 94份被检血清均采自青海省海晏县哈勒景乡永丰村的流产较严重的绵羊群中的生产母羊，采血时均空腹、颈静脉采集，采集后摆成斜面，置4℃冰箱5 h后，放在室温待血清析出后收集血清，-20℃冷冻保存待检。

1.3 其他试剂和耗材 均购自国内和Sigma公司供应商。

1.4 ELISA

1.4.1 抗原的包被 抗原GST-SAG1t和GST，按5 μg/mL剂量加到包被液中（50 mmol/L carbonate bicarbonate buffer，pH 9.6），混匀后加到 96 孔平底微量板（castor）的孔里，每孔50 μL，在4℃条件下培养过夜。……