铁富萍，李德寿，李 娟

（青海省海晏县畜牧兽医站，海晏 812200）

牦牛新孢子虫病ELISA检测

铁富萍，李德寿，李 娟

（青海省海晏县畜牧兽医站，海晏 812200）

牛新孢子虫病是由犬新孢子虫（Neospora caninum）寄生于犬、牛、绵羊、山羊、马等动物的中枢神经系统、肌肉、肝及其他内脏引起的一种原虫病，可使孕畜发生流产或死胎，新生胎儿发生神经系统和运动障碍等［1-3］。犬和郊狼是其终末宿主。新孢子虫隶属顶复门、孢子虫纲、真球虫目，现已广泛分布于北美、欧洲、澳大利亚和新西兰等国家或地区，在羊、山羊、鹿、犀牛和马上广泛流行，且在水牛、红狐、灰狐、北美草原小狼、骆驼和猫科动物中已经报道发现了N.caninum血清抗体。新孢子虫对牛的危害主要是妊娠母牛流产或产死胎、弱胎、木乃伊胎，从而造成乳牛或肉牛的生产性能降低而被淘汰［4］，严重威胁养牛业的发展。为明确青海省海晏县牦牛新孢子虫病感染情况，笔者等于2009年8月，对海晏县牦牛进行N.caninum抗体检测，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 犬新孢子虫重组蛋白GST-NcSAG1t，在前期研究中进行了克隆、表达和纯化；阴、阳性标准血清，均为日本国家原虫中心玄学南博士惠赠，由青海省畜牧兽医科学院兽医所生物技术研究室保存；其他试剂均购自国内或Sigma公司。

1.2 被检血清的采集与处理 135份被检血清均采自青海省海晏县自然放牧的牦牛群，均空腹、颈静脉采血，采集后摆成斜面，置4℃冰箱5 h后，室温下析出并收集血清，-20℃冷冻保存待检。

1.3 ELISA检测步骤

1.3.1 抗原的包被

按5 μg/mL剂量将抗原GST-NcSAG1t和GST加入包被液中（50mM碳酸盐缓冲液，pH9.6），混匀后注入96孔平底微量板（Nunc，Denmark），每孔50μL，4℃培养过夜。……