王昆 吴阳 杨昱 刘超

结缔组织生长因子(CTGF)作为TGF-β的下游效应介质，在高糖血症-转化生长因子β(TGF-β)-CTGF-肾间质纤维化模式中起着重要的作用。而阻断CTGF导致的肾小管间质纤维化将有效延缓糖尿病肾病的发展。

研究表明[1]，肝细胞生长因子(HGF)在糖尿病肾病发展过程中存在着潜在的治疗作用。而目前，多数研究均着重于HGF阻断TGF-β所致的肾小球系膜细胞及肾小管上皮细胞纤维化，但对于CTGF在阻断上述过程中的作用并不明确。本实验先前的研究表明HGF对CTGF的表达有抑制作用，如能证明其对CTGF所致肾小管上皮细胞纤维化过程亦有阻断作用将进一步为HGF治疗糖尿病肾病提供有效证据。

本试验将通过观测rhHGF对CTGF刺激下肾小管上皮间质纤维化的影响来进一步探讨HGF在此过程中的具体作用。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 细胞培养试剂HKC细胞株，重组人HGF(rhHGF，Peprotech公司，美国)和重组人CTGF(rhCTGF，Peprotech公司，美国)。

1.1.2 RT-PCR试剂Trizol(Gibco，美国)，逆转录试剂盒(Promega，美国)，PCR试剂盒(Promega，美国)，聚合酶链反应引物(英骏生物技术，中国)。

1.1.3 Western印迹法试剂分光光度仪(Pharmacia Biotech，美国)，垂直电泳仪(BioLabs，美国)，PVDF印迹膜(Millipore，美国)，ECL发光反应系统(Cell Signaling，美国)，鼠抗人α-SMA单克隆抗体(Santa Cruz，美国)，鼠抗人GAPDH单克隆抗体(Santa Cruz，美国)，辣根过氧化物酶标记的山羊抗鼠IgG抗体(Santa Cruz，美国)。

1.2 方法

1.2.1 人肾小管上皮细胞株(HKC)培养HKC用含10%FCS的DMEM/F12培养液传代培养，培养条件为37℃，5%CO2。0.25%胰蛋白酶消化细胞后，以1×106/瓶的密度接种于25 ml培养瓶。用10%FCS-DMEM/F12培养细胞6 h后，以无血清培养基培养12 h，使细胞同步于静止期。

HKC孵育18 h后，吸弃培养液，分3组:①换以新鲜DMEM/F12营养液(葡萄糖终浓度为5.5 mmol/L)，继续培养78 h。……