王 婧，张 杰，张 颖，马宁宁，谢良志

1中国医学科学院 北京协和医学院 细胞工程中心，北京 100005

2神州细胞工程有限公司，北京 100176

骨形态发生蛋白 (bone morphogenetic protein，BMP)是转化生长因子β超家族的成员，是广泛分布于动物骨组织的酸性蛋白质，在修复骨质缺损和促进骨折愈合、造血系统分化、神经发育和修复等方面发挥重要作用［1］。其中BMP-2诱导成骨的活性最强，是骨骼系统形成和正常发育所必不可少的因子。重组人骨形态发生蛋白2的成熟肽 (recombinant human bone morphogenetic-2 mature peptide，rhBMP-2m)已经被美国FDA批准用于骨质损伤、额面修复及脊椎融合，因此rhBMP-2m具有广泛的临床应用前景。目前，国内外关于rhBMP-2m及其单克隆抗体的生产一直受到工艺的限制不适合其推广应用，如复性困难、工艺难以放大等。本研究利用简单的原核表达系统 (E.coli)获得具有生物学活性的rhBMP-2m并制备能检测真核细胞表达rhBMP-2m的单克隆抗体，为rhBMP-2m研究和商业化生产奠定基础。

材料和方法

材料 雌性Balb/c小鼠 (北京维通利华实验动物技术有限公司);辣根过氧化物酶标记的兔抗鼠IgG(北京义翘神州生物技术有限公司);小鼠胚胎成骨细胞前体细胞MC3T3-E1(中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心);SP琼脂糖凝胶FF填料、反相层析 SOURCE30填料 (美国 GE公司);Tris-HCl、NaCl、尿素、尼克酸等化学试剂 (上海生工生物工程有限公司);大肠杆菌菌株BL21(DE3)/pET24-rhBMP-2m、瞬时转染的 pSTEP-rhBMP-2/293细胞株、转染试剂盒 (北京义翘神州生物技术有限公司)。高压均质仪 (加拿大 ATS工业系统有限公司);7L磁力搅拌罐 (上海保兴生物设备工程有限公司);高效高速冷冻离心机、台式高速离心机 (美国贝克曼库尔特有限公司)。……