李 园 张大燕 徐文元 郭美霞 曹坳程

（中国农业科学院植物保护研究所，北京100193）

枯萎病主要危害番茄（Lycopersicum esculentumMill.）、辣椒等作物的茎部维管束。发病初期，植株中、下部叶片在中午时呈褐色萎蔫，早晚恢复正常；随病害发展，植株中、上部更多叶片开始发病萎蔫，但不脱落；至最后全株叶片萎蔫发黄，整株枯死。病症有时仅出现在茎的一边，或一片叶一边发黄而另一边正常。剖视茎、叶柄及果柄，可见其维管束均呈褐色。潮湿环境下，病株茎基部产生粉红色霉（黄绍岗，1994；徐艳辉 等，2008）。病程进展较慢，15～30 d才枯死，无乳白色黏液流出，有别于青枯病。发病率15%～20%，严重时植株全部枯死，对产量造成很大的损失（程爱昀，2010）。本试验对北京平谷地区的番茄枯萎病病株进行分离、纯化，运用分子生物学技术对病原菌进行诊断鉴定，以期为防治番茄枯萎病提供参考。

1 材料与方法

1.1 番茄枯萎病病组织采集

2010年 12月于北京市平谷区温室进行样品采集，主要采集番茄病株的茎、叶部分 5～10株，将所采集的番茄病组织（图1）保存于4 ℃ 冰箱备用。

图1 供试番茄枯萎病病组织

1.2 番茄枯萎病病原分离与鉴定

采用PDA+S培养基对采集到的番茄枯萎病病原菌进行分离。培养基成分：1 000 mL灭菌水，38 g马铃薯葡萄糖琼脂，5 g琼脂，0.05 g硫酸链霉素。病原菌的分离培养采用常规组织分离法，从病株根部切下3 mm×3 mm×1 mm的小块，放入70%酒精消毒30 s，然后转入1%次氯酸钠溶液浸泡2 min，用无菌水清洗3次，置于PDA+S培养基上，在25 ℃培养箱内恒温培养7 d（郑莉 等，2006）。培养皿内观察病菌形态。

1.3 菌丝体收集及DNA提取

在无菌操作台上，用刀片轻轻刮下培养皿中病原菌菌丝，并将其收集至 EP管中。……