李朋梅，张明，张镭，刘晓，张相林#（.中日友好医院药学部，北京市0009；.北京韩美药品有限公司，北京市 03）

利塞膦酸钠（Risedronate sodium）用于治疗骨质疏松，可有效抑制骨吸收、改善骨质结构，效果良好[1]。与其他双膦酸盐类药物相比，利塞膦酸钠具有高效、安全、服用剂量小等优点，具有良好的发展前景[2]。目前国内尚未见利塞膦酸钠片溶出度分析方法的文献报道。本试验首次建立了高效液相色谱（HPLC）法测定利塞膦酸钠片浓度从而计算溶出度的方法，经方法学验证，本方法完全适用于利塞膦酸钠片的溶出度测定。

1 仪器与试药

Agillent 1100液相色谱系统（安捷伦科技有限公司）；ZRS-8G智能溶出试验仪（天津市天大天发科技有限公司）。

国产利塞膦酸钠片（北京韩美药品有限公司，批号：100601、100602、100603，规格：每片 5 mg）；进口利塞膦酸钠片（法国赛诺菲-安万特公司，批号：C001，规格：每片5 mg）；利塞膦酸钠标准品（中国药品生物制品检定所，批号：100613-200401，含量：88.2%）；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Shiseido C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：缓冲液（含5 mmol·L－1磷酸二氢铵、2 mmol·L－1四丁基溴化铵、1.5 mmol·L－1乙二胺四乙酸二钠，用氢氧化钠调节pH至7.2）-甲醇（75∶25，V/V）；检测波长：262 nm；柱温：25 ℃；流速：1.0 mL·min－1；进样量：100 μL。理论板数按利塞膦酸钠峰计不低于4 000。取“2.2”项下标准品溶液和供试品溶液及溶剂（水）进样分析，色谱见图1。

图1 高效液相色谱图Fig 1 HPLC chromatograms

2.2 溶液的制备

精密称取利塞膦酸钠标准品适量，加水稀释成每1 mL含10 μg的溶液，即得标准品溶液。

取供试品6片，分别投入6个溶出杯内，按规定的转速启动溶出仪，计时，按溶出度测定法（2010年版《中国药典》（二部）附录第二法）[3]，以水500 mL为溶剂，转速50 r·min－1，水温（37.5±0.5）℃依法操作，经30 min时，取溶液10 mL，过滤，去除初滤液3 mL，取续滤液即得供试品溶液。

2.3 检测波长选择

称取利塞膦酸钠标准品适量，加水溶解成20 mg·L－1的溶液，在190～400 nm波长范围内测定吸光度。因标准品溶液在262 nm有最大吸收，故选择262 nm作为检测波长。

2.4 线性关系考察

精密称取利塞膦酸钠标准品20.69 mg，加水制成103.45 mg·L－1的贮备液，分别移取1.0、5.0 mL置于100 mL容量瓶中，另取1.0、2.0、3.0、5.0 mL置于10 mL容量瓶中，加水制成每1 mL含利塞膦酸钠1.03、5.17、10.35、20.69、31.04、51.73 μg的溶液，依次进样测定，以利塞膦酸钠浓度（c）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程为A＝63.027c－0.737 7（r＝0.999 9，n＝6）。结果表明，利塞膦酸钠检测浓度线性范围为1.03～51.73 μg·mL－1。

2.5 精密度试验

分别制备含利塞膦酸钠8.62、10.35、12.13 μg·mL－1的溶液，于同日内（5次）、连续5 d每日精密量取100 μL溶液进样，记录色谱，计算峰面积及日内RSD和日间RSD。结果日内RSD分别为0.16%、0.21%、0.22%，日间RSD分别为0.45%、0.53%、0.38%，表明测定方法的精密度良好。

2.6 溶液稳定性试验

取浓度为10.56 μg·mL－1的供试品溶液在室温放置，分别于制备后的 0、1、2、4、8、12、24 h进样测定，结果 RSD 为0.29%。表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.7 回收率试验

精密称取利塞膦酸钠16、20、24 mg，各3份，置于100 mL容量瓶中，加入4片量辅料，加水溶解并稀释至刻度，精密移取续滤液5 mL置于100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得供试品溶液。另取标准品适量，精密称定，加水溶解并稀释成每1 mL中含10 μg的标准品溶液。按外标法计算含量及回收率，结果见表1。

表1 回收率试验结果（n＝9）Tab 1Results of recovery test（sn＝9）

2.8 介质的选择

按照“2.10”项下方法操作，分别以水、0.1 mol·L－1盐酸、pH6.8缓冲盐溶液为溶出介质，分别于5、10、15、30、45 min取样10 mL，过滤，同时补充等温同体积的溶出介质。取续滤液100 μL，测定，计算累积溶出度（%），绘制溶出曲线。结果，利塞膦酸钠在3种溶出介质中的溶出行为没有明显差异，以简单方便为原则，选择水为溶出介质，具体数据详见表2。

2.9 转速的选择

以水为溶出介质进行片剂溶出度测定，转速分别选择50、75、100 r·min－1，按照“2.10”项下方法操作。结果，在3 种转速下，利塞膦酸钠片累积溶出度均无明显差异，因此选择转速为50 r·min－1。

表2 利塞膦酸钠片在3种介质中的累积溶出度结果（±s，n＝6）Tab 2 Accumulative dissolution of Risedronate sodium tablets in 3 kinds of medium（±s，n＝6）

表2 利塞膦酸钠片在3种介质中的累积溶出度结果（±s，n＝6）Tab 2 Accumulative dissolution of Risedronate sodium tablets in 3 kinds of medium（±s，n＝6）

累积溶出度/%pH6.8缓冲盐溶液78.4±1.9 95.2±1.3 98.3±1.7 100.0±2.3 101.6±0.8时间/min 5 10 15 30 45水84.8±1.4 93.9±2.1 96.8±0.9 98.7±1.2 99.4±2.7 0.1 mol·L－1盐酸76.0±1.1 92.8±2.0 96.2±1.0 97.4±2.2 97.6±2.5

2.10 溶出度测定

以水500 mL为溶出介质，转速为50 r·min－1，水温（37.5±0.5）℃，取利塞膦酸钠片6片，分别放入溶出杯中，于5、10、15、30、45 min时取样10 mL，过滤，同时补充等温同体积的溶出介质。取续滤液100 μL，测定，计算各时间点的累积溶出度。结果，30 min时利塞膦酸钠基本溶出完全，因此，确定溶出时间为30 min，限度为标示量的80%。国家与进口样品溶出度数据比较详见表3。

表3 国产与进口利塞膦酸钠片累积溶出度结果（±s，n＝6）Tab 3 Accumulative dissolution of domestic and imported Risedronate sodium tablet（s±s，n＝6）

表3 国产与进口利塞膦酸钠片累积溶出度结果（±s，n＝6）Tab 3 Accumulative dissolution of domestic and imported Risedronate sodium tablet（s±s，n＝6）

时间/min 5 10 15 30 45累积溶出度/%批号C001 81.0±0.7 90.7±1.9 94.8±2.1 98.9±1.7 100.2±1.9批号100601 79.5±1.2 91.9±0.9 95.7±1.8 98.3±2.1 100.5±0.8批号100602 81.0±1.5 92.3±2.2 98.0±1.0 98.3±1.7 97.8±2.6批号100603 82.4±1.2 96.7±0.7 97.1±1.9 98.1±1.4 102.9±1.6

3 讨论

根据以上试验，确定利塞膦酸钠片采用HPLC法测定浓度，水500 mL作为溶剂，溶出度测定方法为桨法，转速50 r·min－1，溶出时间为30 min，限度为标示量的80%。通过系统适用性试验、线性关系考察、溶液稳定性试验、回收率试验、介质和转速的选择，结果表明，建立的溶出度测定方法简便易行，准确度高，可用于利塞膦酸钠片溶出度的测定。

药物的体外溶出度是评价其内在质量的重要指标。研究发现国产3批利塞膦酸钠片溶出度与进口的利塞膦酸钠片在15 min之内溶出度均大于85%，且15 min时，两者平均累积溶出度的偏差小于±15%，根据溶出曲线相似性评价方法[4]，可以认为两者的溶出行为是基本相似的。但对于体外累积溶出度的比较，溶出曲线的相似性并不意味着生物等效，只是可在一定程度上预测生物等效性研究情况，提高生物等效性研究的成功率。因此，该制剂体内溶出行为还有待人体生物利用度试验的验证。

[1] 郝卫强，刘文英，狄 斌，等.高效液相色谱法测定利塞膦酸钠片的含量[J].中国药科大学学报，2001，32（4）：286.

[2] Siris ES，Chines AA，Altman RD，et al.Risedronate in the treatment of Paget’s disease of bone：an open label，multicenter study[J].J Bone Miner Res，1998，13（6）：1 032.

[3] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典（二部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：附录86.

[4] 谢沐风.溶出曲线相似性的评价方法[J].中国医药工业杂志，2009，40（4）：308.