余 南，崔 进，程相华，周国宝

(1.广州萝岗区妇幼保健所中心实验室, 广东 广州 510730；2. 广州开发区医院，广东 广州 510730)

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)在我国流行。长期感染可发展为肝硬化和肝癌，严重威胁患者健康。得益于疫苗的推广，HBV的水平传播受到控制，以母婴传播为主的垂直传播越来越引起人们的重视。本研究选择19～35岁青年妇女HBV感染者为研究对象，了解HBV基因型的分布。此外，本实验室前期初步建立了HBV大S蛋白基因变异纵向研究方法[1]。在此方法基础上，我们对获得的HBV B/C基因型共同感染(co-infection)病例样本进行病毒种群分析。

1 材料和方法

1.1 标本来源及试剂仪器

2007年11月至2009年12月到广州开发区医院传染科、妇产科就诊的19～35岁妇女HBV感染者，采集空腹血3 mL分离血清，4 ℃保存不超过1周内检测。TAQ酶、pMD18-T载体为TaKaRa公司产品。DNA胶纯化试剂盒(QIAquick Gel Extraction Kit)为QIAGEN公司产品。大肠埃希菌JM109为本实验室保存，感受态自行制备。荧光定量PCR仪瑞士罗氏公司产品LightCycler，运行计算机软件Roche Molecular Biochemicals LightCycler Software (Version 3.5.3) 。普通热循环仪ABI2700(美国)。

1.2 检测

乙肝五项检测:采取ELISA法。ALT和AST在全自动生化仪上完成，分别采用紫外-乳酸脱氢酶法和紫外-苹果酸脱氢酶法。HBV-DNA定量检测采用荧光定量PCR法(达安公司Cat：#DA-BL051)。HBV基因分型采用乙型肝炎病毒基因分型检测试剂盒(PCR-反向点杂交法)。

合理的教学目标是弥补缺陷的重要手段。教学目标对应学生的学习目标，不是一概而论，每位学生的学习水平、学习能力、学习状态都不同，对应的学习目标自然不同，教师要因材施教，分层制定教学目标。例如利用主题探讨式互动学习《几何概型》这一课时，制定四至六个学习目标，采用分层互动，要求每位学生达到自身对应层次的学习目标。……