高慎霞 毛用敏 陈 倩 赵莉莉 崔让庄

血浆高密度脂蛋白（HDL）水平降低是冠心病（CHD）发生的独立危险因素之一[1]。腺苷三磷酸（ATP）结合盒转运体A1（ATP-binding cassette trans⁃porter A1，ABCA1）在启动胆固醇逆转运和HDL生成起始阶段发挥着关键作用[2]。ABCA1基因序列中某些核苷酸变异可改变其活性并影响HDL水平[3]。ABCA1基因启动子区域有多个转录因子的作用元件，其中-220 bp附近区域为ZNF202的结合位点，此处有一个同向重复序列可变数（variable number of tandem repeats，VNTR）多态位点，为ACCCC插入缺失变异（VNTR-ZNF）。本研究旨在对ABCA1基因启动子区域VNTR-ZNF位点插入/缺失多态性进行观察并探讨其与血浆HDL水平的关系。

1 对象与方法

1.1 研究对象 随机抽取天津市胸科医院2007年9月—2009年4月住院的心肌梗死患者（按照WHO1979年诊断标准）166例（CHD组），其中男116例，女50例，平均年龄（56.2±9.7）岁，均有持续性胸骨后剧烈疼痛，血清心肌酶升高及心电图ST-T变化。对照组99例，为同期本单位健康体检者，其中男71例，女28例，平均年龄（51.9±7.4）岁。

1.2 方法 （ 1）基因组DNA制备采用Triton低渗缓冲液溶血法从白细胞中提取。（2）PCR扩增引物参照文献设计[4]，上游引物：5′-CCC TAA GAC ACC TGC TGT ACCC-3；′下游引物：5′-CTG AGA ACC GGC TCT GTT GGT-3′。PCR（扩增体系反应体积为25 μL。各成分终浓度分别为：Tris-HCl 60 mmol/L，（NH4）2SO415 mmol/L，pH 9.5，MgCl22.5 mmol/L，脱氧核糖核苷三磷酸（dNTP）0.2 mmol/L，引物各0.4 μmol/L，Taq酶 2 .5 U，模板DNA 0.5 μg。循环温度：95℃5 min变性；95℃ 3 0 s、62℃ 3 0 s、72℃ 1 min，35个循环；最后72℃延伸7 min。（3）PCR扩增产物经8%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离基因型，用凝胶成像系统分析结果。（4）血脂测定：HDL及HDL亚组采用PEG20000进行沉淀去除低密度脂蛋白（LDL）和极低密度脂蛋白（VLDL），酶法测定上清液中高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平。

1.3 统计学方法 根据公式计算各等位基因频率，Har⁃dy-Weinberg公式计算各基因型（p+q=1，2pq=杂合型基因频率）的理论值（野生型：样本总数×p2；……