崔敬茹 郑荣秀 刘戈力 杨箐岩 梁东春

随着社会经济的飞速发展，人们对身高的关注度越来越强，重组人生长激素（recombinant human growth hormone，rhGH）治疗矮小症也逐渐为人们所接受[1]。生长激素受体（growth hormone receptor，GHR）是生长激素（growth hormone，GH）发挥作用的中介，GHR基因的多态性可能导致其在不同个体中的表达水平或功能上的差异。有研究表明外显子3缺失的基因多态性可以导致GHR对GH反应性的不一致，从而导致不同个体对GH治疗反应的不一致[2]，不同种族中GHR基因多态性分布不同[3]。本研究旨在了解矮小症儿童和正常儿童GHR基因外显子3缺失多态性的分布差异，为今后探讨其是否与矮小症的发病有关，并结合临床指标建立可靠的GH治疗预测模式奠定基础。

1 对象与方法

1.1 研究对象 自 2009年9月—2010年6月于天津医科大学总医院小儿内分泌科就诊的矮小症患儿中选出满足如下条件的143例作为试验组：（1）身高处于同年龄、同性别正常健康儿童生长曲线第3个百分位数以下或低于2个标准差（SD），符合矮身材标准。（2）生长缓慢，生长速率<4 cm/年。（3）骨龄落后（2.5±0.4）岁。（4）头颅磁共振结果显示下丘脑-垂体区无异常。其中生长激素缺乏症（growth hormone defi⁃ciency，GHD）58 例，小于胎龄儿（small for gestational age，SGA）40例，特发性矮小（idopathic short stature，ISS）45例，平均年龄（9.0±2.6）岁。收集同期在我院进行健康体检的儿童，选取身高处于同年龄、同性别健康儿童生长曲线均值±1SD范围的170例作为对照组，平均年龄（9.5±1.8）岁。每位自愿者取静脉血3 mL，并签订知情同意书。乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝，-20℃保存备用。

1.2 方法

1.2.1 DNA的提取 D NA提取采用天津润泰科技发展有限公司生产的小量血液DNA提取试剂盒（产品代码：GD2311-01）提取血液基因组DNA。紫外分光光度计，测定其光密度值。

1.2.2 目的基因扩增及PCR产物 GHR外显子3缺失多态性的检测参见文献[4]中方法。PCR上游引物为G1：5′-TGT GCTGGTCTGTTGGTCTG-3′；下 游 2 条 引 物 分 别 为 G 2：5′-AGTCGTTCCTGGGACAGAGA-3；′ G 3 ： 5′-CCTGGATTAA CACTTTGCAGACTC-3′。PCR反应体系如下：10×PCR buffer 2.5 μL，Taq 聚合酶1 μL，上下游引物（20 μmol/L）各1 μL，模板DNA 2 μL（含基因组DNA 50 ng），dNTP（10 mmol/L）2 μL，加三蒸水14.5 μL至总体积25 μL。经94℃预变性5 min，94℃变性30 s，65℃条件下退火30 s，72℃延伸90 s，循环35次，最后72℃延长7 min。PCR扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳分离，溴化乙锭染色，紫外灯下判断结果。……