刘小转，李三强，任江涛，席守民

CCl4诱导的肝损伤模型是研究肝损伤的最经典的一种实验性肝损伤模型，其模型对于研究肝损伤的发病机制、治疗和预防肝损伤以及筛选保肝药物有重要的用途。增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)，又称周期素(cyclin)，是真核细胞DNA 合成所需的一种36kD 核蛋白，是DNA 聚合酶δ 的辅助蛋白，与细胞增殖和DNA 合成有关［1］。因此，PCNA 是评价肝脏再生的一个指标，也是一个有用的预后指标。本实验研究PCNA 在CCl4诱导小鼠急性肝损伤过程中的动态表达，以探讨CCl4诱导小鼠急性肝损伤过程中的肝脏再生的规律。

1 材料与方法

1.1 材料 健康清洁级昆明种雄性小鼠100 只，体质量22 ±2 g，由河南科技大学医学院实验动物中心提供;CCl4为分析纯，天津凯通化学试剂有限公司产品;橄榄油(食用油);PCNA 鼠源性单克隆抗体和辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗均购自北京中杉金桥生物技术有限公司;ALT、AST 检测试剂盒购自中生北控生物科技股份有限公司。

1.2 方法

1.2.1 动物分组和模型制备 取100 只小白鼠，按体重随机分成10 组，每组10 只，分别为对照组和模型组(注射CCl4后3、6、12、24、30、36、42、48、54 h 分别为1 组)，各组均自由饮水，食普通鼠颗粒饲料。同时给模型组小鼠腹腔注射浓度为0.1% CCl4食用油溶液0.1 mL/10 g 造模，分别在造模后3、6、12、24、30、36、42、48、54 h 颈椎脱臼致死，分别取各组5只共50 只小鼠肝脏制备10%肝匀浆;另有同样处理50 只小鼠摘除眼球采血制备血清。

1.2.2 血清ALT、AST 活性检测 按试剂盒说明书操作，测定血清ALT、AST 活性。

1.2.3 Western blotting 法检测 利用考马斯亮蓝G250 蛋白定量后取70 μg 蛋白样品经SDS PAGE 电泳后，将蛋白转……