崔子春

山东淄博矿业集团中心医院，山东 淄博 255000

1 材料与方法

1.1 临床资料 我院1998年1月－2002年1月手术切除或经尿道膀胱肿瘤电切标本65例 (原发癌)，经病理学检查诊断为膀胱移性细胞癌。男50例，女15例。年龄为34－75岁，平均年龄51岁。所有TCCB标本根据TNM分为2组:浅表性肿瘤组 (Tis，T1期)20例，浸润肿瘤组 (T2－T4期)45例;根据 WHO病理分级分2组:低级组(G1)17例，高级组 (G2+G3)48例。正常膀胱粘膜15例，男10例，女5例。

1.2 方法 采用免疫组化SP法检测S100A4及MMP－2表达。石蜡标本4um厚连续切片4张 ，其中2张分别行S100A4及MMP－2免疫组化检测，1张作HE染色复查诊断，一张不加一抗作阴性对照，已知阳性的大肠癌组织切片为阳性对照。15例正常膀胱粘膜切片作正常对照。S100A4及MMP－2均为细胞质内表达，镜下观察肿瘤细胞胞质出现黄色、棕黄色、棕褐色颗粒状，染色明显高于背景为阳性。在双盲的情况下由两位病理科主任医师对每张切片进行全面观察，每例切片随机选10个高倍视野 (400倍)。以阳性细胞百分率及染色强度为判定标准。阴性 (－):染色细胞数＜10%;弱阳性 (±):阳性细胞数10%～40% ，染色浅淡;阳性 (+):阳性细胞数在40%～80% ，染色强度中等;强阳性 (++):阳性数＞80% ，染色较深。

1.2.1 切除的标本经10%福尔马林固定，常规脱水，石蜡包埋，4μm厚连续切片，分别进行 HE染色，免疫组化染色。

1.2.2 免疫组化 采用PV－9000试剂盒两步法。

试剂:一抗为兔抗人基质金属蛋白酶MMP－9，多克隆 (1:50);兔抗人基质金属蛋白酶 MMP－2，多克隆(1:100);兔抗人S100A4蛋白，多克隆 (1:200);鼠抗人P53蛋白，单克隆 (1:100);试剂盒以及DAB均购自北京中杉金桥有限公司。

染色步骤:(1)石蜡切片脱蜡水化后，用PBS(PH7.4)冲洗3次，每次3分钟。……