翟娜娜，黄世金，旁 霞

(1.黄河科技学院医学院人体解剖与组织胚胎学胚教研室;2.郑州大学第一附属医院病理科，河南省肿瘤病理重点实验室，郑州450052)

食管鳞癌作为消化系统中最常见的恶性肿瘤之一，浸润性强，很容易发生淋巴转移。分化抑制基因-1(Inhibitors of differentiation-1，Id1)可作用于多种信号途径来参与人类恶性肿瘤的发生、发展和转移［1］。目前，对Id1在肿瘤发生、发展过程中的作用存在争议，为了探讨Id1在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的作用，作者采用免疫组织化学的方法检测了Id1蛋白ESCC组织中的表达，将会为ESCC诊断和治疗提供新的线索。

1 材料与方法

1.1 一般材料 57例食管癌来自河南省肿瘤医院手术切除标本，其中男32例，女23例，年龄31～72岁，所有病例术前均无化疗、放疗及免疫治疗史。所有标本分别在无坏死癌灶、癌旁3 cm以内及远端正常黏膜组织处取材，经40 g/L多聚甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋，连续切片，切片厚度4～6 μm，分别用于苏木精-伊红(HE)染色和免疫组织化学染色。经HE染色病理组织学证实，癌灶组织均证实为ESCC。按WHO分类标准(1996年)进行组织学分级:高分化11例，中分化27例，低分化19例。浸润至肌层20例，浸润到外膜及邻近组织37例;伴淋巴结转移者39例，无淋巴结转移者18例。癌旁组织中34例为不典型增生。远端正常黏膜组织均为正常食管黏膜。

1.2 主要试剂 Id1鼠抗人单克隆抗体购自Santa Cruz公司，稀释度为1∶50。S-P免疫组化试剂盒和DAB显色剂均购自福州迈新生物技术开发公司。

1.3 免疫组织化学染色 采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶 (S-P)连接法检测，DAB显色，苏木素复染，详细步骤严格按S-P试剂盒说明操作，每批实验同时设立阳性和阴性对照，用已知阳性切片作为Id1蛋白的阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。

1.4 免疫组织化学及原位杂交染色结果判定 Id1蛋白呈棕黄色，主要定位于细胞质。结果判断如下［2～3］:高倍镜下随机选取5个视野(每个视野观察细胞数不少于200个)，按阳性细胞所占百分比及着色深浅进行结果判定。采用9分评分制:按照阳性细胞比例≤10%为1分，10% ～50%为2分，＞50%为3分;按染色强弱:阴性为0分;淡黄色染色为1分;中度黄色染色为2分，棕黄色染色为3分。然后按照“阳性细胞得分×染色强弱得分”计总分，总分＜3为阴性，总分≥3为阳性。

1.5 统计学方法 应用SPSS 11.0统计学软件，行χ2检验，相关性检验用Spearman相关分析，检验水准 α =0.05。

2 结果

Id1蛋白主要存在于癌组织细胞质中，呈浅黄色至深黄色颗粒(图1)。在ESCC癌变过程中Id1蛋白表达在癌组织、癌旁不典型增生组织及正常黏膜组织中的阳性表达率依次降低，组间比较有明显差异(P＜0.05)，见表1。Id1蛋白表达均与ESCC患者的分化程度、浸润深度和淋巴结转移有关(P＜0.05)，见表 1。

图1 正常黏膜组织与癌组织中Id1蛋白的表达(SP×200)

3 讨论

作为消化系统中最常见的恶性肿瘤之一，研究人员对食管癌已经做了大量的研究，结果表明，食管癌的发生发展是一个多阶段、多因素参与的一个复杂过程［4］。其中涉及许多癌基因及抑癌基因的变化，但具体调控机制仍不完全清楚。本研究中作者应用免疫组织化学技术系统的对比研究了食管黏膜上皮癌变过程中Id1蛋白的变化规律及其与ESCC临床病理因素的关系。

分化抑制基因-1(Id1)属于HLH转录因子家族成员之一，在调节基因表达、调节细胞周期及细胞分化等方面起重要的作用［5］。自1990年 Benezra［6］等发现该分子以来，大量研究表明，Idl在多种恶性肿瘤组织中表达增加，可推进细胞周期的演进，促进肿瘤细胞增殖、分化、凋亡和血管生成的信号通路的调控，而且与肿瘤的发生、发展和转移有密切关系。Id1在肿瘤中的表达有所争议，许多学者发现在乳腺癌［7］、肺癌［8］等临床病理中，Id1 高表达并与浸润转移有密切关系。

本实验对收集到的57例食管癌标本进行免疫组织化学染色分析，结果显示Id1蛋白在癌组织、正常组织和不典型增生组织中均有表达，但在癌组织中的表达水平显著增高，差异有统计学意义(P＜0.05)。表明Id1基因在食管鳞状细胞癌中蛋白水平有表达上调，提示Id1的异常表达可能与食管癌的发生、发展密切相关;Id1蛋白的表达与肿瘤的分化程度有关，提示Id1的表达对食管癌恶性程度的评估有一定的价值;并且Id1蛋白的表达在浸润深度和淋巴结转移中具有明显差异，表明Id1的异常表达与食管癌的浸润、转移密切相关，这与其他学者［9］等的分析的结果一致。

表1 Id1蛋白表达与食管鳞癌临床生物学行为的关系

总之，Id1蛋白与ESCC的发生、发展和转移密切相关，Id1基因可作为ESCC诊断和治疗的生物学指标，但Id1在肿瘤中的作用机制目前尚不清楚，有待进一步深入研究。

［1］Perk J，Iavarone A，Benezra R.Id family of helix-loop-helix proteins in cancer［J］.Nat Rev Cancer，2005，5(8):603-614.

［2］杨晓文，王世清，莫 平.MMP-7和TIMP-2表达在遗传性非息肉病性大肠癌侵袭转移中的作用［J］.重庆医学，2009，38(7):817-820.

［3］高冬玲，李晟磊，赵志华，等.食管鳞癌组织中RECK和MMP-9基因mRNA检测与分析［J］.中国肿瘤临床，2008，35(13):748-751.

［4］李玉林.病理学［M］.第6版.北京:人民卫生出版社，2004.

［5］Ruzinova MB，Benezra R.Id proteins in development，cell cycle and cancer［J］.Trends Cell Biol，2003，13(8):410-418.

［6］Benezra R，Davis RL，Lockshon D，et al.The protein Id:a negative regulator of helix-loop-helix DNA binding proteins［J］.Cell，1990，61(1):49-59.

［7］Yap WN，Zaiden N，Tan YL，et al.Id1，inhibitor of differentiation，is a key protein mediating anti-tumor responses of gamma-tocotrienol in breast cancer cells［J］.Cancer Lett，2010，291(2):187-199.

［8］Rothschild SI，Kappeler A，Ratschiller D，et al.The stem cell gene“inhibitor of differentiation 1”(ID1)is frequently expressed in non-small cell lung cancer［J］.Lung Cancer，2011，71(3):306-311.

［9］Hui CM，Cheung PY，Ling MT，et al.Id-1 promotes proliferation of p53-deficient esophageal cancer cells［J］.Int J Cancer，2006 ，119(3):508-514.