杜东梅，纪晓花

(河北省廊坊卫生职业学院，河北廊坊065001)

卵巢浆液性囊腺癌是常见的原发性卵巢恶性肿瘤，其恶性程度高，5年生存率仅为25% ～30%。2009年7月～2011年6月，我们采用流式细胞术(FCM)检测了Survivin和ki67蛋白在卵巢浆液性囊腺癌组织中的表达，进一步探讨卵巢浆液性囊腺癌的发生机制。

1 材料与方法

1．1 材料 选择廊坊市人民医院病理科手术切除的卵巢浆液性囊腺癌组织28份(囊腺癌组)，患者年龄24～75岁，平均50．08岁。均经病理证实诊断，术前均未接受放化疗;按照FIGO 2000年修订的国际妇产科联盟分期标准，Ⅰ、Ⅱ期12例，Ⅲ、Ⅳ期16例;分化程度为高中分化9例，低分化19例;有淋巴结转移者10例。另选浆液性囊腺瘤10份(囊腺瘤组)，正常卵巢组织5份(正常组)。三组一般资料无统计学差异。

1．2 Survivin、ki67 蛋白表达检测 单细胞悬液制备:用石蜡切片机切取组织切片，每例石蜡组织切取50 μm厚的切片10片，置于10 ml的试管中，用二甲苯脱蜡(置于37℃的恒温箱)24 h，依次用100%、95%、70%和50%的酒精梯度水化，各20 min。然后加入蒸馏水5 ml，将组织置于120目不锈钢网上，下置一平皿，用眼科剪刀将组织剪碎，用眼科镊子轻搓组织，边搓边用生理盐水冲洗，直至将组织搓完为止。将平皿中的混悬液用300目铜钢网滤去组织团块，收集滤下的细胞悬液。以1 000 r/min的转速离心沉淀4 min，弃去上清液，得到单分散细胞悬液，备用。细胞的免疫荧光标记采用间接免疫荧光标记法。Survivin和ki67蛋白表达定量分析以荧光指数(FI)表示蛋白的相对含量，FI=样品蛋白表达的平均荧光强度/正常对照样品的平均荧光强度。

1．3 统计学方法 采用SAS8．1统计软件，方法采用t检验、方差分析、非参数检验，计量数据以±s表示。检验水准α=0．05。

2 结果

2．1 Survivin和ki67蛋白表达 见表1。

表1 各组Survivin和ki67蛋白表达比较(FI值，±s)

表1 各组Survivin和ki67蛋白表达比较(FI值，±s)

注:与正常组比较，*P ＜0．05;与囊腺瘤组比较，△P ＜0．05

组别 n Survivin蛋白 ki67蛋白囊腺癌组 28 1．79±0．35＊△ 2．53±0．54＊△囊腺瘤组 10 1．36 ±0．17* 1．89 ±0．25*正常组5 1．00 ±0．20 1．00 ±0．38

2．2 Survivin和ki67蛋白表达与浆液性囊腺癌临床病理特征的关系 见表2。

表2 Survivin和ki67蛋白表达与浆液性囊腺癌临床病理特征的关系(FI值，¯x ±s)

2．3 Survivin与ki67蛋白表达的相关性 浆液性囊腺癌组织中Survivin与ki67蛋白的表达量呈正相关(r=0．43，P ＜0．05)。

3 讨论

卵巢浆液性癌是发病隐匿，多数病例发现时已是中晚期。因此，探究卵巢癌发生、发展的机制对于卵巢癌的早期诊断和评价肿瘤的恶性程度及预后有重要意义。

研究证实，与肿瘤细胞凋亡密切相关的蛋白—凋亡抑制蛋白过度表达引起的细胞凋亡受阻与肿瘤的发生、发展有密切关系。Survivin是凋亡抑制蛋白家族的成员之一，主要表达于胚胎及未完全分化的器官，在除胸腺、睾丸、胎盘外的终末分化的成人组织中无表达。而在肝癌、宫颈癌、膀胱癌、肾癌等多种恶性肿瘤的研究中均显示其表达增强。Erkanli等［1］采用免疫组化证实，子宫内膜癌组织中Survivin表达呈阳性，且高于子宫内膜不典型增生和增殖期子宫内膜，但与子宫内膜癌的肌层浸润、分化程度和淋巴结转移无关。Liguang等［2］用反转录PCR技术检测卵巢组织中 Survivin mRNA表达，结果显示Survivin mRNA在卵巢交界性肿瘤和恶性肿瘤中表达增高，且其表达与卵巢癌的临床分期、组织分化及淋巴结转移相关。以上结果表明Survivin的异常表达可能与肿瘤的发生、发展过程关系密切。本研究囊腺癌组Survivin蛋白表达量明显高于囊腺瘤组及正常组，提示Survivin在卵巢癌的发生中起一定的作用;Survivin蛋白表达量与临床分期相关，提示Survivin可作为评价卵巢浆液性囊腺癌的恶性程度及预后的一个重要指标。

ki67是一种与细胞周期相关的增殖细胞核抗原，表达于除G0、G1早期以外的增殖细胞的各期，与PCNA指数、DNA倍数含量等表示细胞增殖的指标相比，ki67不受生长因子诱导，半衰期短，且背景干扰小，因此得到广泛应用。在多种恶性肿瘤中可见ki67的高表达。Salakou等［3］对手术切除的重症肌无力患者的胸腺组织进行研究，结果显示ki67在胸腺癌中的表达增高，其表达高于胸腺瘤、胸腺增生组织。李秀娟等［4］研究显示，ki67在卵巢癌中的表达显著高于卵巢良性上皮性肿瘤;并且晚期卵巢癌ki67表达显著高于早期，提示晚期卵巢癌具有更高的增殖活性，恶性度高。本研究囊腺癌组ki67蛋白表达量明显高于囊腺瘤组及正常组，提示ki67表达可作为判断卵巢肿瘤良恶性的参考;ki67蛋白表达量与临床分期相关，提示ki67表达可作为评价卵巢癌恶性程度及预后的指标。Survivin蛋白的表达量与ki67蛋白的表达量呈正相关，提示Survivin、ki67蛋白在卵巢癌的发生、发展中有协同作用。

总之，Survivin与Ki67在卵巢癌的发生、发展中起促进作用。

［1］Erkanli S，Bolat F，Kayaselcuk F，et al．COX-2 and survivin are overexpressed and positively correlated in endometrial carcinoma［J］．Gynecologic Oncology，2007，104(2):320-325．

［2］Liguang Z，Peishu L，Hongluan M，et al．Survivin expression in ovarian cancer［J］．Experimental Oncology，2007，29(2):121-125．

［3］Salakou S，Tsamandas AC，Bonikos DS，et al．The potential role of bcl-2，bax，and ki67 expression in thymus of patients with myasthenia gravis，and their correlation with clinicopathologic parameters［J］．Eur J Cardiothorac Surg，2001，20(4):712-721．

［4］李秀娟，廖琪，孙中华，等．ki67和Survivin在卵巢上皮性癌中的表达及意义［J］．中国全科医学，2009，12(8B):1534-1535．