李秋恬，洪 敏，陈 晓，李少遊，缪延栋，耿计伟，李 臣，尹燕鹰，董 坚

(昆明医学院第一附属医院，昆明650032)

IHA-01(代号)是从云南传统药用植物水朝阳旋覆花中提取、精制的天然药物，主要含半萜类抗肿瘤活性成份。2009年8月～2010年12月，我们对IHA-01的敏感细胞株进行了筛选，并对其诱导敏感细胞株凋亡的作用进行了观察，旨在为IHA-01作为抗肿瘤药物的开发和应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料 IHA-01(本课题组委托中科院昆明植物所提取，相对分子质量为306)。细胞株:人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MDA-MB-435，人肠癌细胞株 HCT-8、HT29、LS-174T，人肺癌细胞株 Calu-1，人肝癌细胞株 SMMC-7721，人鼻咽癌细胞株CNE-2，人胆管癌细胞株 QBC-939，人神经胶质瘤细胞株U251(均购于上海细胞生物研究所细胞库，本室保存);人个旧肺癌细胞株GLC、YTLC(本实验室传代培养)。FACS Calibur流式细胞仪(美国 B-D公司)。

1.2 敏感细胞株筛选

1.2.1 细胞培养及干预 分别选取对数生长期的上述12种肿瘤细胞接种于96孔板，贴壁培养24 h;均分为两组。实验组加入IHA-01，终浓度分别为3.125、6.25、12.5、25 和 50 μg/ml，每个浓度设 5 个复孔;对照组加入等体积不含药物的培养基，96孔板置于温箱中培养48 h。

1.2.2 观察项目及判定标准 CCK-8法测定各组细胞增殖抑制率:试剂作用后采用酶标仪测定波长450 nm、650 nm处各孔吸光度值(A值)，细胞增殖抑制率=［1－(A加药组－A空白组)/(A阴性对照组－A空白组)］×100%。用线性回归方法计算半数抑制浓度(IC50)。IC50值最低者为敏感细胞株，IC50值最高者为不敏感细胞株;细胞增殖抑制率最高的作用浓度为最佳作用浓度。

1.2.3 筛选结果 IHA-01对12株肿瘤细胞均有不同程度的抑制杀伤作用，细胞增殖抑制率随IHA-01浓度增加而升高;最佳作用浓度为1.29 μg/ml。……