刘素杰 赵大伟 张 卓

（吉林省肿瘤医院，吉林 长春 130012）

CIK是将人外周血单个核细胞在体外多种细胞因子（如抗CD3McAb、IL-1a、IL-2、IFN-γ）刺激后获得的一群异质细胞[1]。乳腺癌是女性常见恶性肿瘤，发病率有逐年上升的趋势，乳腺癌的生物治疗是继手术、放化疗之外的又一项治疗手段。本实验通过对比研究健康人与乳腺癌患者两种不同来源的CIK增殖能力及活性，进一步探讨CIK细胞的抗肿瘤作用，为临床应用提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 研究对象

健康人外周血样本10例，年龄27～56岁，样本来自吉林省肿瘤医院体检中心。乳腺癌患者外周血样本10例，年龄39～58岁，样本来自吉林省肿瘤医院乳腺二科，全部病例均经病理证实。

1.2 主要试剂

CD3单克隆抗体（北京邦定公司）；IL-1a、IL-2、IFN-γ（Strthmann Biotech GmbH，Germany），MTT（美国Sigma公司）。

1.3 方法

1.3.1 CIK细胞制备及扩增

两种不同来源地外周末梢血血样，利用Isopaque离心法密度梯度分离外周血单个核细胞（PBMC），加入RPMI1640培养液，10%胎牛血清培养，加入100μg/mL，重组IFN-γ孵育24h后，再加入50μg/mLCD3McAb，100u/mL人重组IL-1a，300u/mLIL-2放置于37℃，5%CO2孵箱中培养，细胞每隔2d传代培养。

1.3.2 CIK细胞的增殖测定

动态观察细胞增殖，用血细胞计数板法计数细胞。

1.3.3 MTT法检测CIK细胞对肿瘤细胞株杀伤活性

培养14d的CIK细胞为效应细胞，分别与乳腺癌细胞株（MCF-7）、肝癌细胞株（SMMC-7721）、肺癌细胞株（SPC-A-1）3种靶细胞混合，按50∶1效靶比加入96孔板，每组3复孔。另设单独靶细胞和效应细胞组，置于37℃，5%CO2孵箱中培养48h，离心弃上清，每孔加二甲基亚砜150μL，振荡溶解10min后，用酶标仪570nm测OD值，计算CIK的杀瘤活性。杀伤活性（%）=[1-（实验组OD值-效应细胞OD值）/靶细胞OD值]×100%。

1.4 统计学处理

采用SPSS11.5统计软件包进行统计分析，健康人与乳腺癌患者CIK细胞对3种肿瘤细胞株的抑瘤比较，采用成组比较t检验。……