陶红玲，李 彬

(1.浙江省舟山市妇幼保健院，浙江 舟山 316000;2.浙江省舟山市食品药品检验所，浙江 舟山 316000)

心可舒胶囊收载于《卫生部颁药品标准中药成方制剂(第十五册)》，由山楂、丹参、葛根、三七、木香5味中药组成，具有活血化瘀、行气止痛的功效，用于治疗气滞血瘀引起的胸闷、心绞痛、高血压、头痛、颈项疼痛、心律失常和高血脂等症。该药品的质量标准比较简单，只有木香、丹参的薄层色谱鉴别，无含量测定指标。为保证制剂质量的稳定可控，笔者建立了反相高效液相色谱法测定主药丹参中丹参酮ⅡA的含量。现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱系统，包括G1311A四元泵、G1329A自动进样器、DAD检测器，Agilent-Chemstation色谱工作站;USC-502型超声处理器(上海波龙电子设备有限公司)。丹参酮ⅡA对照品(中国药品生物制品检定所，批号为111538-200301);心可舒胶囊(重庆希尔安药业有限公司，批号分别为090802，090503，091009);缺味样品根据处方自制;甲醇为色谱纯;水为重蒸馏水;其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Agilent Zorbax Extend C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇-水(77∶23);检测波长:270 nm;柱温:室温;流速:1.0 mL/min。理论板数按丹参酮ⅡA峰计大于2 000。

2.2 溶液制备

精密称取经五氧化二磷减压干燥24 h的丹参酮ⅡA对照品17.60 mg，置于50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取此贮备液2.00 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，制成质量浓度为70.40 μg/mL的对照品溶液。取心可舒胶囊内容物0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定质量，超声处理30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，续滤液用0.45 μm微孔滤膜过滤，置棕色瓶中，即得供试品溶液。按处方比例和制法制成缺丹参的阴性样品，精密量取阴性样品1.0 g，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

阴性干扰试验:取丹参酮ⅡA对照品溶液、供试品溶液和缺丹参的阴性对照品溶液，在上述色谱条件下分别进样，得到相应的色谱图(图1)。结果表明，供试品溶液中丹参酮ⅡA色谱峰与其他组分的色谱峰完全分离，阴性对照品溶液对参酮ⅡA的测定无干扰。

线性关系考察:分别精密吸取对照品溶液 0.5，1，2，4，6，8，10，15，20 μL，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定。以丹参酮ⅡA的峰面积为纵坐标(Y)、进样量为横坐标(X)，以最小二乘法进行线性回归，得线性方程 Y=5 889.3 X-3.377，r=1.000 0(n=9)。结果表明，丹参酮ⅡA进样量在0.035 2～1.408 μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:取对照品溶液，按上述色谱条件重复进样6次，测定丹参酮ⅡA的峰面积，结果的 RSD为0.4%(n=6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取供试品溶液，按上述色谱条件，在24 h内每隔一定时间测定1次峰面积，结果的 RSD为0.6%(n=6)，表明丹参酮ⅡA在室温下24 h内稳定。

重复性试验:精密称取同一批(批号为090802)样品5份，每份0.5 g，按供试品溶液制备方法制备溶液，测定并计算丹参酮ⅡA含量，结果的 RSD为1.1%(n=5)，表明方法重复性良好。

加样回收试验:精密称取已知含量的样品(批号为090802)9份，每3份分别精密加入丹参酮ⅡA对照品贮备溶液(0.352 g/L)1.0，2.0，4.0 mL，按上述色谱条件测定峰面积并计算含量。结果见表1。

2.4 样品含量测定

分别吸取对照品溶液和供试品溶液，按上述色谱条件测定，以外标一点法计算含量，共测定了3批样品，结果3批样品中含丹参酮ⅡA分别为 0.018，0.020，0.018 mg/粒。

3 讨论

参考相关文献资料[1-4]，确定丹参酮ⅡA含量测定时的检测波长为270 nm。考察了用甲醇加热回流1 h和用甲醇作为提取溶剂，超声处理15，30，60 min几种方法，测定结果无明显变化，结合以上试验结果和试验操作等因素，最后确定甲醇作为提取溶剂，超声处

表1 加样回收试验结果(n=9)

理30 min的方法。曾选用 Agilent Zorbax Extend型 C18柱、Agilent Zorbax SB 型 C18柱、Discovery C18柱、Dikma DiamonsilTM型 C18柱、大连依利特 C18柱(均为250 mm×4.6 mm，5 μm)5种色谱柱对样品进行测定，流动相均为甲醇-水(77∶23)。结果采用第1种、第2种和第4种色谱柱时分离度均较好，但是用第1种色谱柱得到的色谱峰峰形对称性更好，峰也较窄，所以试验最终选用Agilent Zorbax Extend型C18柱。本试验表明，反相高效液相色谱法操作简便，结果准确，重现性好，可用于心可舒胶囊的质量控制。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:52.

[2]曾祥林.HPLC法测定丹葛颈舒胶囊中丹参酮ⅡA的含量[J].药物分析杂志，2009，29(7):1 166-1 168.

[3]付小六.HPLC测定丹黄祛瘀胶囊中丹参酮ⅡA的含量[J].中成药，2008，30(3):460-461.

[4]陈喜生，王松长，胡滨湘.HPLC法测定扶脾养肝丸中丹参酮ⅡA的含量[J]. 中国药师，2009，12(6):822-823.