王康乐,陈佩林,马以桐,叶 辉,印庆艳,朱道立

(南通大学生命科学学院,江苏南通226019)

骨骼肌是一个非均质组织,存在功能多样性是由于肌球蛋白存在多种亚型。肌球蛋白是热休克蛋白,由2个重链(MHC)和4个轻链(MLC)组成 。肌球蛋白头部重链在N-末端包含大量球状的水解ATP动力结构域和一个形成细丝的棒状C-末端。肌球蛋白的这些部分被一个8.5 nm长的α-螺旋连接,称为“肌球蛋白的颈部”,颈部与一个碱性的和一个调控的MLC相关联。慢缩纤维通常含有碱性慢型MLC的亚型MLC1s和调控MLC的亚型MLC2s。同样,快缩纤维通常含有碱性快型 MLC的亚型MLC1f与不同比例的M LC3f及调控MLC的异构体MLC2f。然而,IIA型纤维通常也包含慢型MLC的亚型。我们应用解剖法结合电生理、SDH酶组化和SDS-PAGE电泳[1-2],以生后各年龄组大鼠快肌代表胫前肌和慢肌代表比目鱼肌为对象,观察不同发育阶段肌纤维改变,以期对快慢肌相互作用原理及其运动机制有所了解。

1 材料与方法

1.1 材料 (1)主要仪器设备:RM6240多道生理信号系统(成都仪器厂);恒冷切片箱(Leica CM3000型,德国产)、DYY-Ⅲ28C 型电泳槽(北京六一厂)、DYY605稳压稳流电泳仪(南京新校园生物技术研究所)。(2)主要试剂药品:氯化硝基四氮唑蓝、琥珀酸脱氢酶(SDH)为Sigma公司产品,丙烯酰胺(分析纯),N,N'-亚甲基双丙烯酰胺(分析纯),十二烷基磺酸钠(SDS),三(羟甲基)氨基甲烷(T ris)(优级纯),2-巯基乙醇(2-Mercaptoethanol)(中国医药集团上海化学试剂公司)。

1.2 方法

1.2.1 电生理 生后2周、6周、12周健康SD(rattus norvegicus sprague-dawley)大鼠各6只,雌雄不拘(由南通大学实验动物中心提供),以20%氨基甲酸乙酯(乌拉糖)经腹腔注射麻醉(1 g/kg体重),剖检右后肢,用双电极分别插入胫前肌和比目鱼肌,肌电参数为电压强度:0.1 V,波宽:0.2 ms,频率:2.5 Hz,正电压连续单刺激。……