邓海平,蒲万霞 ,梁剑平,倪春霞,孟晓琴

(中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所中国农业科学院新兽药工程重点开放实验室甘肃省新兽药工程重点实验室,甘肃兰州730050)

奶牛乳房炎是一种主要由病原微生物引起的奶牛常见病,是造成奶牛养殖业生产经济损失的重要因素之一,不仅影响奶牛养殖业、乳品工业的发展。金黄色葡萄球菌感染是引起奶牛乳房炎最主要的原因之一,乳房炎奶样中其检出率均在30%以上[1-2]。及时准确的掌握病原菌的种类和分子流行病学趋势对于该病的临床治疗和疫苗的研制都非常重要。随着分子生物学的发展,越来越多的分子生物学方法被应用于病原菌的鉴定和分子流行病学研究,16S rRNA保守序列就是常用于细菌鉴定分子标记之一。DNA随机多态性扩增(random amplified polymorphic DNA,RAPD)技术是一种简便、灵敏可行的新的遗传标记技术。该技术问世后迅速在国内外被广泛应用于微生物的基因分型与鉴定[3-4]。近年来有关金黄色葡萄球菌基因分型的研究主要集中于人医来源的菌株,畜源菌株的基因分型研究相对较少。本试验利用16S rRNA保守序列对引起内蒙古地区奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌进行鉴定及RAPD基因分型研究,探讨该地区金黄色葡萄球菌性奶牛乳房炎分子流行病学特点,为我国奶牛乳房炎基因工程疫苗的研制提供可靠的理论依据。

1 材料与方法

1.1 试剂及仪器 DNA Ladder Marker(分子量依次为4 500 bp,3 000 bp,2 250 bp,1 000 bp,750 bp,500 bp,250 bp)、DL 2 000 Marker、Premix Ex Taq酶等购自宝生物工程(大连)有限公司;DNA提取试剂盒购自Tiangen生物制品公司;金黄色葡萄球菌标准菌CVCC2246购自中国兽医药品监察所;基因扩增仪(Biometra,UK),DYY-8C型电泳仪(北京六一仪器厂)。……