弓 超,王凌云,周欢敏

(内蒙古农业大学生命科学学院,内蒙古呼和浩特 010018)

牛乳腺上皮细胞体外分离和培养*

弓 超,王凌云,周欢敏*

(内蒙古农业大学生命科学学院,内蒙古呼和浩特 010018)

从健康奶牛乳房无菌采取乳腺组织,通过添加两种不同的培养液来分离、培养、纯化牛乳腺上皮细胞,研究乳腺上皮细胞的体外培养效果。结果表明,使用组织块接种可以得到大量细胞用于体外培养。在以DMEM/F12为基础的普通培养液中进行乳腺上皮细胞体外培养,原代细胞生长较慢,细胞形态不典型。而添加表皮生长因子、胰岛素、氢化可的松所组成的完全培养液中,奶牛乳腺上皮细胞生长良好。并通过细胞形态学观察,细胞染色体核型分析,荧光免疫细胞染色方法鉴定了培养的细胞表达上皮细胞特异的角蛋白K14,K15。结果表明,分离培养的细胞是牛乳腺上皮细胞。

乳腺上皮细胞;体外培养;奶牛

动物乳腺生物反应器是伴随动物转基因技术而发展起来的一项高新生物技术。利用这项技术可以从动物乳汁中源源不断地获取用于医疗或保健目的的有生物活性的基因表达产物。使用乳腺上皮细胞来检测乳腺特异性表达载体的功能,这一方法具有快捷、方便且能够真实反映乳腺表达载体在生物体内表达水平等优点[1]。牛乳腺上皮细胞系的成功构建,为后续转基因动物生产的研究及检测目的基因的表达情况打下了基础。

牛乳腺上皮细胞的培养已有半个多世纪的历史,但目前已建立的牛乳腺细胞系并不多。……