李泽鸿，彭其胜

(1.吉林农业大学生命科学学院，长春 130118;2.吉林大学畜牧兽医学院，长春 130062)

革兰氏阴性细菌中已发现四种蛋白质分泌途径，称为 I、II、III、IV 型分泌机制［1］。II和 IV 型是Sec系统依赖途径(Sec基因编码一些分泌途径必需的Sec蛋白质，这些分泌途径被称为Sec依赖的分泌途径)。蛋白质被这两种分泌途径运输经过细胞膜前，有一个独立的跨过内膜的步骤。II型和IV型分泌蛋白质的共同之处在于外排到周质时蛋白的氨基端上存在一个疏水信号序列。信号序列帮助蛋白质分泌，当分泌蛋白到达周质时会被信号肽酶剪切掉［2］。I型是 Sec非依赖途径。与II型和IV型分泌途径相比较，I型和III型分泌不依赖于Sec系统，所以不需要分泌蛋白的氨基端加工。I型和III型途径的蛋白质分泌是一个连续的过程，不存在明显的周质中间体［3－4］。

重组蛋白在大肠杆菌胞周质中分泌表达应属于II型分泌机制［2］，在重组蛋白的氨基端通常融合一段信号肽基因，当翻译完成后，这条信号肽就会被大肠杆菌胞质中的信号肽酶切除，这是一条传统的分子生物学基本原理。但是，本文在构建一种重组毒素DAB389(Gly4Ser)2－αMSH时，发现另一种原核胞周质分泌表达机制:在该重组蛋白的前面没有信号肽基因，却能在胞周质中分泌表达。为此将这种现象提出并做初步探讨。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株、质粒和细胞 质粒 pET28a(+)、pET20b(+)、Rosettablue(DE3)、BL21(DE3)pLysS购置于Novagen公司;pMD18T载体试剂盒购于大连宝生物公司;pET28a/DAB389(Gly4Ser)2－EGF质粒由军事医学科学院军事兽医研究所张国利博士惠赠;大肠杆菌JM105由吉林农业大学生命科学学院实验室保存。……