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山核桃脂肪代谢相关cDNA文库的构建

2011-05-29黄银芝黄有军曾燕如

浙江农林大学学报 2011年1期
关键词:检测方法

黄银芝,周 秦,黄有军,曾燕如

(浙江农林大学 亚热带森林培育国家重点实验室培育基地,浙江 临安 311300)

植物油脂在植物生长、发育和繁衍过程中扮演着重要的角色。合成后的植物油脂主要有2个去向:一是用来构成生物膜的甘油脂和磷脂,另一个是储藏在种子中,即储藏态脂,常以甘油三酯(TAG)的形式存在。储藏态脂是一种封闭的相对惰性的光合产物,其主要成分的改变不影响植物总的分解功能,因此,植物油脂的生物合成途径特别适合遗传操作[1]。山核桃Carya cathayensis为浙江省重要的经济树种,其种仁的含油率平均达到70.0%,远远超过油菜Brassica campestris新品系 “超油2号”(52.8%)和 “世界油王”油棕Elaeis guineensis(55.0%)[2],为高含油量的树种,且其油质多为不饱和脂肪酸。因此,推测山核桃果实发育的过程中可能存在其特有的脂肪代谢机制。互补脱氧核糖核酸(cDNA)文库的构建基于基因表达过程产生的信使核糖核酸(mRNA)。通过构建cDNA文库能直接分离到生命过程中的一些调控基因,了解这些基因编码蛋白质的相互作用关系,估计大多数基因的表达水平,并发现一些组织特异的基因。本研究以糖类转变成油脂并积累时期的山核桃果实为材料构建cDNA文库,以期深入研究脂肪代谢的分子调控机制,挖掘和鉴定更多的脂肪代谢及调控的关键基因。

1 材料与方法

1.1 材料

cDNA文库构建用的山核桃果实采自山核桃产区浙江省临安市板桥乡罗塘村(30°N,119°E)1株约40年生正值盛果期的山核桃树,现场采集的果实置于液氮速冻后带回实验室-70℃保存备用。……

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