虞先濬 刘辰 徐近 龙江 倪泉兴

复旦大学附属肿瘤医院胰腺肝胆外科，复旦大学上海医学院肿瘤学系，上海 200032

CD24+CD44+胰腺癌细胞的获取及其干细胞特性的初步鉴定

虞先濬 刘辰 徐近 龙江 倪泉兴

复旦大学附属肿瘤医院胰腺肝胆外科，复旦大学上海医学院肿瘤学系，上海 200032

背景与目的：近年研究发现，肿瘤内存在极小一部分细胞，决定肿瘤的恶性表型及生物学特性，被称为“肿瘤干细胞”。本研究拟从人原发胰腺癌组织中找到具有干细胞特性的胰腺癌细胞，为今后靶向干预胰腺癌干细胞，解决胰腺癌治疗的临床难题提供研究基础。方法：将人原发胰腺癌组织种植于NOD/SCID小鼠成瘤，对移植瘤细胞进行流式细胞分选；将流式细胞仪分选获得的细胞用无血清、含有生长因子的DMEM/F12培养基培养，观察细胞的生长、传代及体外干细胞球形成能力；将细胞接种于非肥胖型糖尿病/重症联合免疫缺陷型 (Nonobese diabetic/severe combined immunodeficiency，NOD/SCID)小鼠，观察、比较成瘤率，免疫组化法检测干细胞移植瘤肿瘤分化相关抗原Ki67、CK7及甲基化调控因子MBD1的表达；免疫荧光检测细胞Hedgehog、BMI-1的表达。结果：人原发胰腺癌组织种植于NOD/SCID小鼠可部分成瘤，对移植瘤细胞进行流式细胞分选，获得CD24+CD44+细胞(获得率0.6%～1.8%)；将CD24+CD44+细胞用无血清、含有生长因子的DMEM/F12培养基培养，细胞呈悬浮球状生长，可连续传代并能再次形成干细胞球；将102个CD24+CD44+细胞接种于NOD/SCID小鼠，成瘤率12.5%(1/8小鼠成瘤)，将103个CD24+CD44+细胞接种于NOD/SCID小鼠，4周后100%成瘤，而同样数量的CD24-CD44-胰腺癌细胞则无法成瘤(P＜0.05)，免疫组化法检测干细胞移植瘤中部分细胞表达Ki67、CK7及MBD1阳性；……