赵 鹏， 余旭亚， 黄遵锡 ， 唐湘华， 李俊俊

(1.生物能源持续开发利用教育部工程研究中心，云南昆明 650092;2.云南师范大学生命科学学院，云南昆明 650092;3.昆明理工大学生命科学与技术学院，云南昆明 650224)

冬凌草学名碎米亚，是唇形科香茶菜属植物Rabdosia rubescens(Hemsl.)Hara又称Isodon rubescens(Hemsl.)C.Y.Wu et Hsuan。冬凌草甲素是冬凌草中主要活性成分，在体内和体外均具有较强的抗肿瘤和抗菌活性［1-3］，其分析方法有比色法［4］、薄层扫描法［5］、HPLC［6］和 HPCE［7］等。其中比色法和薄层扫描法存在定量不准确的缺点;HPCE法虽然快速、试剂用量少且柱不易受污染而优于HPLC，但是进样精度较HPLC低，存在重现性较差、线性范围窄和灵敏度较低等缺陷。目前HPLC法是较为常用的冬凌草甲素的测定方法。本实验采用UPLC测定冬凌草中冬凌草甲素含量，比常规HPLC省时9 min以上，是一种简便、快捷、高效、准确的检测方法。

1 材料与方法

1.1 仪器和试剂

ACQUITY UPLC(美国 Waters公司)，ACQUITY UPLC PDA检测器(美国Waters公司)，Empower 2色谱数据工作站(美国 Waters公司);超声波提取器(Automatic Science，60W);冬凌草甲素对照品购自西安旭煌生物技术有限公司(批号090621);冬凌草全草药材购自市场;乙腈(美国Fisher公司，色谱纯);甲醇(AR);水为超纯水。

1.2 色谱条件

Acquity UPLC BEH C18超高效色谱柱(50 mm×2.1 mm，1.7 μm);柱温40℃;样品室温度8℃;检测波长242 nm，进样量为 1 μL。

表1 洗脱梯度

1.3 对照品贮备液的制备

准确称取冬凌草甲素对照品5.5 mg，甲醇溶解并定容到25 mL，制得0.22 mg/mL的冬凌草甲素对照品溶液。

1.4 样品溶液的制备

取冬凌草全草药材，粉碎过40目筛，精密称取1 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL称重，超声处理40 min，放至室温，称重，用甲醇补至原重，过滤，取滤液2 mL，甲醇定容至10 mL，经微孔滤膜(0.22 μm)滤过作为供试样品溶液。……