张丙秀 李景富 王傲雪 许向阳

（东北农业大学园艺学院，黑龙江 哈尔滨 150030）

细胞壁成分的解离是果实软化的直接原因（Fischer & Bennett，1991），番茄（Lycopersicon esculentum Mill.）果实细胞壁主要由半纤维素、纤维素、果胶和蛋白组成，占干物质质量的90 %（Redgwell & Fischer，2002），番茄果实半纤维素中的甘露糖多以甘露聚糖的形态存在（Seymour et al.，1990），甘露聚糖酶（Endo-β-1, 4-mannanas）的功能就是水解甘露聚糖之间的β-1, 4共价键（Bewley，1997）。番茄不成熟突变体及一些能正常成熟品种果实中甘露聚糖酶活性很低或没有活性，这些品种果实的软化程度较慢（Bewley et al.，2000；Banik et al，2001），所以该酶可能与果实的软化相关，但还不明确该酶在果实软化中是否起到重要作用。目前，番茄果实中的甘露聚糖酶基因已经被克隆出来，被命名为LeMan4基因（Carrington et al.，2002）。反义 RNA技术是研究基因功能的一种有效途径（宋艳茹和马庆虎，1995），该技术在油菜（Knutzon et al.，1992）、苹果（Dandekar et al.，2004）、西洋梨（Gao et al.，2007）等作物上得到了成功的应用。在蔬菜学领域，研究较深入的就是耐贮运番茄的培育，Hamilton等（1990）将ACC氧化酶的反义RNA导入番茄植株，使成熟果实的乙烯产生受到97 %的抑制，转基因番茄在室温下的贮存时间明显比对照长。反义RNA技术在保鲜贮存方面研究的诱人前景，已成为选育耐贮藏果树新品种有效的途径之一（Petri & Burgos，2005）。鉴于此，本试验构建了LeMan4基因反义表达载体并将其导入番茄基因组，以期获得LeMan4基因表达的缺陷型植株，探讨LeMan4基因在番茄果实软化中的作用，并为选育耐贮番茄新品种提供材料。

1 材料与方法

1.1 材料及试剂

植物材料：番茄品种Micro-Tom，由东北农业大学番茄课题组提供。

菌株及载体：大肠杆菌DH5α、农杆菌EH105及载体pBI121，由东北农业大学番茄课题组提供。……