李 静，林 晓，高 辉

(1.山东中医药大学附属医院，山东 济南 250011;2.山东省药品检验所，山东 济南 250101)

阿胶补血口服液由阿胶、熟地黄 、党参、黄芪、枸杞子、白术组成，其功效滋阴补血，补中益气，健脾润肺。常用于久病体弱，血亏目眩，虚劳咳嗽［1］，因其疗效好而被广泛应用。黄芪功效成分明确，具有扶正强壮、增强机体抵抗力，其主要成分为黄芪甲苷，因此本文以黄芪甲苷作为含量测定指标，采用高效液相色谱法测定方中主药黄芪中有效成分黄芪甲苷的含量，为该药质量控制提供科学依据。

1 仪器与试剂

Agilent1200高效液相色谱仪，Alltech2000 ELSD检测器，Sartorius CP225D电子天平，KQ－300DE超声波清洗仪;黄芪甲苷对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号为110781－200512);阿胶补血口服液由药圣堂(湖南)制药有限公司(批号:080204、080202、080301、080302)提供;甲醇、乙腈为色谱纯，其余为分析纯。

2 方法与结果［1，2］

2.1 色谱条件 色谱柱:Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈－水(34∶66)为流动相;蒸发光散射检测器;柱温30℃;流速为1.0 mL·min－1;漂移管温度为105℃，气体流量为2.5 L·min－1;理论板数以黄芪甲苷峰计算应不低于4000。

2.2 溶液的制备 对照品溶液:精密称取在五氧化二磷减压干燥器中干燥12 h的黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液。

供试品溶液:精密量取本品50 mL，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40 mL，合并正丁醇提取液，用氨水洗涤2次，每次40 mL，弃去氨水溶液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得。

2.3 线性关系 精密吸取“2.2”项下黄芪甲苷对照品溶液5、10、15、20、25、30 μL，分别注入高效液相色谱仪，测得峰面积。以黄芪甲苷进样量的对数值为横坐标，峰面积积分值对数值为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为Y=1.5462X+5.9448，r=0.9998，结果表明黄芪甲苷在 2.57～ 15.42 μg范围内呈良好的线性关系。

2.4 精密度试验 精密吸取“2.2”项下黄芪甲苷对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪，连续进样6次，测定峰面积。以黄芪甲苷的峰面积的自然对数值计算，RSD为0.28%，实验结果表明本方法进样精密度良好。

2.5 重复性试验 按上述条件与方法对同一批号样品重复分析测定6次，计算黄芪甲苷平均含量为29 μg·g－1，RSD为1.14%(n=6)。实验结果表明本方法重现性良好，方法可行。

2.6 加样回收率试验 精密量取已知含量的样品(含量为29 μg·mL－1)25 mL，共取6份，分别精密加入黄芪甲苷对照品溶液(0.0629 mg·mL－1)10 mL，按上述方法与条件进行测定，分别计算回收率，结果见表1。

表1 回收率实验结果

结果表明:测定方法的回收率良好。

2.7 专属性试验 按照处方比例，取除去黄芪的其他药味，按制备工艺方法制得阴性样品。按上述条件与方法试验，结果阴性样品在与对照品色谱峰相应的位置上，无吸收峰。说明处方中其他药味对测定结果无影响，结果见图1～3。

图1 黄芪甲苷对照品HPLC色谱图

2.8 样品测定 取4批样品各2份，分别制备样品溶液，进行测定，以外标法计算，测定结果见表2。

图2 阿胶补血口服液HPLC色谱图

表2 样品测定结果

3 讨论

3.1 本实验采用三种不同型号的色谱柱，分别是Dikma Kromasil C18(250 mm ×4.6 mm，5μm)、Dikma Diamonsil C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm)、依利特 Hypersil BDS C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)对方法耐用性进行了考察。结果三种色谱柱所测得的对称因子、理论板数等均能符合2005年版药典对高效液相色谱分析的有关要求，表明该方法测定阿胶补血口服液中的黄芪甲苷对色谱柱选择性不强，适用范围广。

3.2 供试品溶液的制备比较了两种提取方法:过大孔吸附树脂提取和直接提取。结果表明过大孔树脂柱可去除一部分杂质，但同时黄芪甲苷也会损失。为保证黄芪甲苷提取完全，采用直接提取方式。

3.3 实验结果表明本文测定方法简便易行，结果准确，重现性好，可有效控制该制剂质量。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典2005年版(一部)［S］.北京:化学工业出版社，2005:213.

［2］袁绍莉，张金炼，朱小虎.HPLC－ELSD法测定保儿宁颗粒黄芪甲苷的含量［J］.中华实用医药杂志，2005，3(15):15－18.