陕西省妇幼保健院(西安 710003) 李爱武 蒋 霞 李 芳 郭 萍

乙型病毒性肝炎是我国的高发病,掌握乙肝病毒在体内的复制情况对准确判断病情以及对抗病毒治疗的准确监测具有重要的意义。目前,绝大多数医疗机构不具备检测 HBV-DNA的条件,只能根据乙肝标志物检测结果粗略判断有无乙肝病毒复制。为探讨HBV-DNA、前 S1抗原(PreS1)与其它 HBV标志物的相关性,正确评价其临床意义,作者采用荧光定量PCR技术、ELISA法分别对 200份 HBsAg阳性血清标本及 40份 HBsAg阴性血清标本进行了 HBVDNA、PreS1和 HBV标志物的检测,以探讨其相关性。

对象与方法

1 对 象 200例 HBV感染者标本均来自本院感染科 2005年8月至2007年9月住院患者,均符合2000年第十次全国病毒性肝炎会议制定病毒性肝炎乙型诊断标准,其中男128例、女 72例,年龄 20～59岁,平均年龄 39.8岁。其中急性乙型肝炎患者血清 25份(抗 HBc-IgM阳性),慢性乙型肝炎患者血清 145份,肝硬化患者血清 30份。对照组选其它类型肝炎 40例作前 S1抗原检测。

2 方 法 ①HBV PreS1检测:HBV PreS1试剂由中国科学院上海生物化学研究所研制,上海阿尔法生物技术有限公司生产。采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(ELISA),按试剂说明书操作。②HBVDNA定量:检测所用仪器系德国 Roche公司生产的Light Cycler自动荧光 PCR仪,HBV-DNA FQ-PCR试剂盒由深圳匹基生物工程公司提供,严格按试剂说明书操作。③HBV血清标志物检测试剂由华美生物工程公司生产,采用 ELISA方法按试剂说明书操作。

3 统计学处理 用 SPSS10.0进行χ2检验,P＜0.05为差异有统计学意义。

结 果

1 HBV-DNA荧光定量及 PreS1抗原检测结果见表1。检测发现,在能够检测到 HBV-DNA的 158份血清样本中(病毒载量大于 103拷贝 /ml)PreS1抗原的阳性率达到 81.6%(129/158)。并且随着血浆中HBV-DNA含量水平的增加,PreS1抗原阳性检出率也随之增加,两者间存在显著相关性(P＜0.001)。

表1 200份标本 HBV-DNA含量与 PreS1检测结果比较

2 不同 HBV血清标志物组合 HBV-DNA荧光定量及 PreS1抗原检测结果 见表2。检测结果显示HBeAg阳性的 91份标本中,HBV-DNA荧光定量阳性 88份,阳性率 96.7%;PreS1抗原阳性 81份,阳性率 89%。HBeAg阴性 109份,HBV-DNA荧光定量阳性 70份,阳性率 64.2%;PreS1抗原阳性 53例,阳性率 48.6%。HBeAg阴性、抗 HBe阳性血清 82份中,PreS1抗原阳性率 54.8%(45/82);PreS1抗原存在于HBeAg、抗 HBe双阴性血清(27)中 8份,阳性率 29.6% (8/27)。

表2 不同 HBV血清标志物组合HBV-DNA、PreS1的检测结果

3 急、慢性乙肝和肝硬化患者 HBV-DNA、PreS1检测结果 见表3。检测结果显示,急性肝炎中 HBVDNA及 PreS1的阳性检出率分别为 96%和 92%。在轻度慢性乙肝中,HBV-DNA及 PreS1的阳性检出率分别为 83.3%和 70%。在此两类肝炎标本中 HBVDNA与 PreS1的阳性检出率没有显著性差异(P＞0.05)。而在中重度慢性乙肝及肝炎肝硬化标本中 HBVDNA的阳性检出率明显高于 PreS1(P＜0.01)。

表3 急、慢性乙肝和肝硬化患者HBV-DNA、 PreS1关系

讨 论

前 S1抗原(PreS1)是由乙肝病毒前 S1编码,由108或 119个氨基酸组成的肽段。其位于 HBVDane颗粒和管型颗粒上,具有高度的免疫原性。由于 PreS1抗原只存在于完整的 HBV颗粒上,所以具有很高的特异性。众多研究认为 PreS1、PreS2及多聚人血清白蛋白受体(PHSA-R)在乙肝病毒侵入肝细胞过程中起重要作用,其在 HBV复制时表达最多,可作为 HBV复制的标志[1,2]。

通过对 200份乙肝患者血清样本的检测可以看出在 158份 HBV-DNA定量阳性的标本中 PreS1抗原阳性率高达 81.6%,且随着病毒含量水平的增加PreS1抗原阳性率也随之升高。因此 PreS1抗原很好的反映了 HBV在体内的复制状况。但应该注意的是在 HBV-DNA阴性的标本中仍有 11.9% PreS1抗原阳性。这可能是由于抗病毒药物所致的 HBV-DNA复制抑制或引物对应的 DNA序列变异等原因所致[3]。

在对不同 HBV血清标志物组合分组进行 HBVDNA荧光定量及 PreS1抗原对比发现,在 HBeAg阴性的标本中仍有 48.6%PreS1抗原阳性,更有 64.2%HBV-DN A荧光定量阳性。可能是由于 HBV基因组前 C区发生变异导致 HBeAg表达障碍。此时 HBeAg阴性并不表明 HBV复制停止或病毒血症消失。因此PreS1抗原可作为一种重要的病毒复制的补充指标。

在对不同感染阶段样本分组比较发现,PreS1抗原在急性乙肝检出率高达 92%,而且在急性乙肝及轻度慢性乙肝样本中 HBV-DNA荧光定量及 PreS1抗原阳性率间没有显著差异,而在中重度慢性乙肝两者阳性率存在显著差异。同时急性及中重度慢性乙肝HBV-DNA荧光定量及 PreS1抗原的阳性率高于轻度慢乙肝。提示一方面在急性感染及中重度慢乙肝阶段病毒复制水平较高,HBV-DNA荧光定量及 PreS1抗原具有良好相关性。另一方面随着疾病的进展 PreS1抗原的检出率较 HBV-DNA有所下降。尤其在进入肝炎肝硬化阶段 HBV-DNA荧光定量和 PreS1抗原都有显著下降,以 PreS1抗原检出率的下降尤甚。其原因可能是随着疾病进展,HBV-DNA与肝细胞的基因组发生整合。随着感染病程延长和病情加重,整合率会增加,从而导致血清 HBV含量减低,检出率下降[4]

综上所述,传统上根据 HBeAg是否阳性来判断HBV的复制情况是非常不严谨的。都应进行血清HBV-DN A定量测定。如果条件有限可以开展 PreS1抗原的检测作为参考和补充指标。这样能够更真实的反映 HBV感染及复制情况。PreS1抗原在早期诊断乙肝、判断预后及确定治疗方案等方面具有重要临床价值。

[1] 徐 蓓,姚光弼.血清乙型肝炎病毒前 S1抗原检测及其与病毒复制的关系 [J].中华实验和临床病毒学杂志,1997,11(2):117-120.

[2] 马亦林,翁心华.传染病学 [M].第 4版.上海:上海科学技术出版社,2006:296-301.

[3] 王清图.乙型肝炎病毒变异的临床意义 [J].胃肠病学和肝病学杂志,2001,10(3):197.

[4] 蔡卫平,唐小平,陈劲峰,等.慢性乙肝 HBV-DNA病后标志和肝损伤程度的关系[J].中国实用内科杂志,1998,3(18):147-148.