李 珍,傅志泉,李春霞,周嘉鹤,胡甜甜

复方苦参注射液是由苦参、白茯苓及土茯苓等经加工制成的纯中药制剂,临床具有抑制肿瘤细胞生长、止痛、改善造血功能、增强化疗效果等作用,其临床报道较多,但有关作用于胃癌及其抗肿瘤作用机制研究却相对不足。本研究以人胃癌BGC-823细胞为研究对象,观察复方苦参注射液对其细胞增殖及凋亡的影响,探讨其作用机制,以期为复方苦参注射液治疗胃癌提供一定的实验依据和理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料来源 人胃癌 BGC-823细胞购于中国医学科学院上海细胞生物研究所细胞库,其为贴壁型上皮细胞,建自于一位 62岁男性胃癌患者。

1.2 药物及试剂 复方苦参注射液由山西振东医药集团生产,国药准字 Z14021231Z14021230,5 ml/支;RPMI-1640培养液及 DNA标准分子量 3 000 bp(DNA分子量别为 3 000 bp、2 000 bp、 1 000 bp、 750 bp、 500 bp、 250 bp、 100 bp)为杭州吉诺生物医药技术有限公司产品;胎牛血清为杭州四季青生物工程材料有限公司产品;噻唑兰及二甲基亚砜 (DMSO)为Amresco分装;PI试剂盒为美国 BD公司产品;公司琼脂糖粉为 Agarose分装;细胞凋亡 DNA-ladder提取试剂为北京博大泰克生物基因技术有限责任公司产品。

1.3 细胞培养 常规复苏人胃癌 BGC-823细胞株,按贴壁方法培养,细胞培养在经过 0.22μm滤膜过滤的 RPMI-1640培养液中 (含 10%热灭活血清,青霉素 100 U/ml和链霉素100μg/ml),在 37℃、5%的 CO2、饱和湿度下进行培养,用PBS配制的 0.15%的胰蛋白酶 (含有 0.02%的 EDTA)消化细胞传代,每周可以传代1～2次,收集指数生长期 BGC-823细胞用于实验研究。

1.4 四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法测定细胞增殖抑制率实验用 96孔培养板内加……