李 光,柴文戍,康 健

阻塞性睡眠呼吸暂停 (obstructive sleep apnea,OSA)在西方国家是一种常见的疾病,其发病率在男性约为 4%,女性约为 2%[1]。OSA可引起行为和神经精神障碍,包括日间嗜睡、短期记忆障碍及理解缺陷。不少研究表明,OSA患者存在氧化应激,进而导致海马神经元凋亡增加,与患者的神经功能损害有关[2]。褪黑素 (MEL)是松果体分泌的一种抗氧化剂,具有广泛的抗氧化能力,外源性应用褪黑素可对自由基起保护作用。因此,本研究选用间歇低氧 (intermittent hypoxia,IH)大鼠模型,模拟 OSA存在的缺氧/再复氧病理生理过程,同时应用抗氧化剂褪黑素进行干预,观察褪黑素能否通过增加抗氧化酶的表达来减轻间歇低氧诱导的海马损伤。

1 材料与方法

1.1 实验动物 为体质量 200～230 g的清洁级雄性健康 SD大鼠 (中国医科大学实验动物中心提供),共 30只。

1.2 主要仪器及试剂 间歇低氧造模设备 (Oxycycler Model A84XO;BioSpherix Instruments,Redfield,NY,USA),氧气和氮气,可见光分光光度计,PCR循环仪 (Sigma 2002),紫外分析仪 (UV3l0,以色列),褪黑素 (美国 Sigma公司产品),超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛 (MDA)测定试剂盒(南京建成生物工程研究所),RT-PCR试剂盒 (Takara公司)。

1.3 间歇低氧大鼠模型的建立 雄性 SD大鼠置于间歇低氧设备(Oxycycler Model A84XO;BioSpherix Instruments,Redfield,NY,USA)中造模,使仓内氧浓度变化于 5%～21%之间,每 8 min循环 1次,最低氧浓度为 5%,最高氧浓度为21%,共 2周 (每天 8∶00～16∶00),对照组 SD大鼠暴露于室内空气中。动物自由进食饮水,动物室温度控制在 22～24℃,相对湿度为 30%～40%,光照 12 h/d(8:00开灯,20:00关灯)。

1.4 实验方法 用随机数字表法将大鼠分为对照组 (CON组)、间歇低氧组 (IH组)、褪黑素治疗组 (MEL组),每组10只,分笼饲养。褪黑素药物使用方法为临用前以无水乙醇溶解,再加 0.9%氯化钠溶液配制,使乙醇浓度为 2%,置 4℃冰箱保存备用,褪黑素 (10 mg/kg)于每天间歇低氧实验前 30 min腹腔注射。……