钟 蓓,杨玉莹 (长江大学动物科学学院,湖北荆州434025)

张西臣 (吉林大学畜牧兽医学院,吉林长春130062)

顾玉芳,陈振威,多 婷 (长江大学动物科学学院,湖北荆州434025)

布鲁氏菌病是由布氏杆菌 (Brucella abortus)引起的导致感染动物流产、不孕不育、生殖器官病变的人畜共患传染病,我国大部分地区都有此病的存在及流行。近年来,其疫情形势更为严峻,仅2009年发病率同2008年相比即上升25.37%[1],此病成为人类发病数上升速度最快的传染病之一[2]。布氏杆菌是革兰氏阴性胞内寄生菌,人感染此病后需长期服用抗生素,易产生耐药性及副作用。因此消除布鲁氏菌病成为公共健康计划中最重要的目标之一[3]。目前我国广泛使用的疫苗有牛S19、羊Rev.1和牛RB51,这些疫苗的使用对当地的品种都有较好的效果,但现有的疫苗始终存在不安全、不稳定、且不能与野毒株相区分等缺点。因此,应用分子生物学技术研制新型分子标记苗和基因工程苗成为该病疫苗研究的必然趋势。

布氏杆菌胞质结合蛋白 (Periplasmic binding protein,PBP39)作为良好的T细胞抗原,被认为是DNA疫苗的免疫抗原候选分子。本研究将布氏杆菌抗原基因pbp39和标记基因p276克隆入大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体pMV361中,构建重组pMV361-pbp39-p276质粒,为布氏杆菌分枝杆菌疫苗的研制提供了前提条件。

1 材料与方法

1.1 质粒和菌株

穿梭表达质粒pMV361(Stover博士构建)由吉林大学张西臣教授惠赠,E.coli DH5α、布氏杆菌、重组克隆质粒PMD 18-T-p276为长江大学动物科学学院动物病原与分子生物学实验室保存,PMD 18-T simple vector为 Takara公司产品。

1.2 主要……

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