杨晓峰，杨新宏，朱艳菊，丁晓旭，李晓明，孙立新

(承德医学院附属医院，河北承德067000)

单核巨噬细胞系统是机体保持内环境稳定的一个最重要系统，广泛参与免疫应答、免疫效应和免疫调节。巨噬细胞的功能是衡量机体免疫水平的一项重要标志，为机体免疫清除突变细胞的重要因素。2007年9月，我们根据IFN－γ可促进MHC－I类抗原表达，微波修复抗原可提高病理组织的抗原性原理，应用IFN－γ和微波制备全细胞瘤苗，观察了此瘤苗对巨噬细胞功能的影响。

1 材料与方法

1.1 材料 BALB/C小鼠，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，体质量14～16 g，8周龄，正常饲养。肝癌细胞H22瘤株:由白求恩医科大学提供，液氮冻存。使用时复苏细胞，接种于含10%胎牛血清(FBS)的1640培养基，培养至对数生长期 ，接种于BALB/C小鼠腹腔传代。

1.2 H22肝癌细胞疫苗(MITTV－H22)及 H22细胞抗原的制备 ①MITTV－H22制备。收集 BALB/C小鼠腹水H22肿瘤细胞，1640培养液洗2遍，常规培养，并加入 IFN－γ(200 U/ml)，培养 48 h［1］。收集H22细胞，生理盐水洗2遍，制成2.5×106/ml的细胞悬液，微波照射20 s(750 W、2450兆赫)，制成MITTV－H22，4℃储存备用。经台盼蓝染色镜下观察证实肿瘤细胞已全部灭活。②H22细胞抗原制备。收集H22细胞，生理盐水洗2遍，调至1×107/ml，将细胞悬液置－80℃冷冻，37℃水浴溶解，反复冻融4次。13 000 r/min、离心60min，吸取上清，过滤除菌，分装，－80℃保存备用。

1.3 实验分组与动物模型制备 小鼠检疫10 d后随机分组。实验组右后肢外侧皮下接种MITTVH22悬液0.2 ml，每周免疫1次，共3次;对照组用生理盐水代替MITTV－H22。末次免疫后第7天处死小鼠，腹腔内注入预冷的Hank's液5 ml/只，轻轻按揉腹部，以充分洗出腹腔巨噬细胞;将腹壁剪开一个小口，吸取腹腔灌洗液收集腹腔巨噬细胞，进行后续实验。……