孙晓红 李淑琴 武宇州 刘 涛 张旖晴 张 岳 魏 玮

(中国中医科学院望京医院脾胃病科，北京 100102)

乙型肝炎病毒e抗原阴性慢性乙型肝炎与前C基因及C基因变异关联性临床研究

孙晓红 李淑琴1武宇州2刘 涛 张旖晴 张 岳 魏 玮△

(中国中医科学院望京医院脾胃病科，北京 100102)

目的 临床观察乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)阴性的慢性乙型肝炎(e-CHB)与前C基因及C基因变异的关联性。方法 将慢性乙型肝炎193例进行血清HBeAg、乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸 (HBVDNA)水平、前C基因核苷酸1896G→A点突变及C基因核苷酸1762碱基A→T和1764G→A联合突变的检测。结果 慢性乙型肝炎193例中，①HBeAg阴性70例(36.27%)，HBeAg阳性123名(63.73%)。②HBeAg阴性前C基因变异率76%，HBeAg阳性前C基因变异率31%，二者比较差异有统计学意义(P＜0.05);HBeAg阴性C基因变异率51%，HBeAg阳性C基因变异率30%，二者比较差异无统计学意义(P＞0.05)。③HBeAg阳性患者中，前C基因或C基因变异群的HBV-DNA水平低于未变异群，差异比较有统计学意义(P＜0.05)，而HBeAg阴性患者中，前C基因或C基因变异群与非变异群比较，血清HBV-DNA水平差异比较均无统计学意义(P＞0.05)。结论 在e-CHB中，前C基因变异与HBeAg转阴具有密切关系，而C基因变异与HBeAg转阴关系不明确;前C基因和C基因变异不能增强病毒毒性，与疾病严重程度可能无关。

肝炎，乙型;慢性;肝炎e抗原，乙型;基因，病毒

乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)转阴通常标志着病毒 复制的中止和临床病情的减轻，然而一些HBeAg阴性患者仍有高病毒血症和活动性肝炎表现，并常伴有前C基因或C基因变异。2010-01—2010-12，我们通过临床观察慢性乙型肝炎 (chronic hepatitis B，CHB)193例血清HBeAg、乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸 (HBV-DNA)水平、前C基因变异及C基因变异的检测结果，研究前C基因及C基因变异与HBeAg阴性的CHB(e-CHB)相关性，结果如下。

1 资料与方法

1.1 诊断标准 参照“慢性乙型肝炎防治指南”(2010年版)［1］。

1.2 一般资料 193例均为河北肝病医院门诊患者。男125例，女89例;年龄5～73岁;病程6～33个月;乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)均阳性，丙肝抗体均阴性。

1.3 检测方法 取清晨空腹肘静脉血液，保存在-80℃。采用全自动生化分析仪(7080型，日立HITACHI公司)，检测HBeAg;HBV-DNA试剂盒由厦门安普利生物工程有限公司提供，使用荧光定量(PCR)方法进行检测(检测范围在4×102～4×107copies/mL之间，HBV-DNA水平≥1×108copies/mL的标本使用HBV阴性血清稀释后再进行检测)，前C基因核苷酸1896G→A点突变用短序列测序试剂盒(由安捷伦科技公司提供)检测，结果用变异百分比率表示［2］;C基因核苷酸1762碱基A→T和1764G→A联合突变的检测采用乙型肝炎病毒(HBV)核心启动子变异检测试剂盒(由安捷伦科技公司提供)检测［2］。

1.4 统计学方法 采用SPSS 13.0统计学软件，数据用均数±标准差(±s)表示，采用t检验;率的比较采用χ2检验。

2 结果

2.1 HBeAg检测结果 193例中，HBeAg阴性 70例(36.27%)，HBeAg阳性 123 例(63.73%)。HBeAg 阴性患者平均年龄34岁，男女比例39∶31;HBeAg阳性患者平均年龄26岁，男女比例86∶37。

2.2 前C基因、C基因变异与HBeAg的关系 HBeAg阴性患者前C基因变异76%，HBeAg阳性患者前C基因变异31%，二者比较差异有统计学意义(P＜0.05);HBeAg阴性患者C基因变异51%，HBeAg阳性患者C基因变异30%，二者比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

2.3 C基因变异与HBV-DNA水平的关系 HBeAg阳性患者中，C基因变异群HBV-DNA水平(6.0 Log copies/mL)低于未变异群(7.0 Log copies/mL)，差异比较有统计学意义(P＜0.05)。HBeAg阴性患者中，C基因变异群HBV-DNA水平(4.6 Log copies/mL)低于未变异群(4.8 Log copies/mL)，但差异比较无统计学意义(P＞0.05)。

2.4 前C基因变异与HBV-DNA水平的关系 HBeAg阳性患者中，前C基因变异群HBV-DNA水平(8.0 Log copies/mL)低于未变异群(8.9 Log copies/mL)，差异比较有统计学意义(P＜0.05)。HBeAg阴性患者中，前C基因变异群HBV-DNA水平(4.8 Log copies/mL)低于未变异群(5.0 Log copies/mL)，但差异比较无统计学意义(P＞0.05)。

3 讨论

C基因区由前C基因和C基因组成，分别负责编码HBeAg及乙型肝炎病毒C抗原(HBcAg)。前C基因变异会导致HBeAg表达减少或终止，临床表现为HBeAg转为阴性，但病毒仍处于活动状态，目前被称为HBeAg阴性的慢性乙型肝炎(e-CHB)。

临床观察结果表明本组慢性乙型肝炎患者中，e-CHB占总体36%，远比相关报道的69%低［3］，可能与实验患者平均年龄较低有关。有研究表明e-CHB患者中高HBV-DNA水平可能与疾病的严重程度有关，因此应进行抗病毒治疗，有报道拉米夫定对e-CHB患者有较好疗效［3］，但仍需进一步研究。

HBeAg阴性患者前 C基因变异76%，显著高于HBeAg阳性患者前C基因变异的31%，而C基因变异二者比较差异无统计学意义(P＞0.05)，表明前C基因变异与HBeAg转阴具有密切关系，而C基因变异与HBeAg转阴关系不明确。

在HBeAg阴性患者中，前C基因或C基因变异群与非变异群比较，血清HBV-DNA水平差异比较均无统计学意义(P＞0.05)，说明前C基因、C基因变异在HBeAg阴性患者中并不能增强HBV-DNA毒性。而在HBeAg阳性患者中，前C基因或C基因变异群的HBV-DNA水平低于未变异群，差异比较有统计学意义(P＜0.05)。说明在HBeAg阴性患者中，前C基因或C基因变异与疾病严重程度可能无关，也不会增强病毒复制的毒性。

有报道HBeAg阴性的患者中，前C基因、C基因都变异的HBV-DNA水平显著低于只有前C基因或C基因变异患者［4］，因此可以认为前C基因变异如果与C基因变异同时发生，可能会导致HBV-DNA水平降低。

［1］中华医学会肝病学分会，中华医学会感染病学分会.慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)［J］.中华肝脏病杂志，2011，19(1):13-24.

［2］Aritomi T，Yatsuhashi H，Fujino T，et al.Association of mutations in the core promoter and precore region of h.0epatitis virus with fulminant and severe acute hepatitis in Japan［J］.J Gastroenterol Hepatol，1998 ，13(11):1125-1132.

［3］Chun YK，Kim JY，Woo HJ，et al.No significant correlation exists between core promoter mutations，viral replication，and liver damage in chronic hepatitis B infection.［J］.Hepatology，2000，32(5):1154-1162.

［4］Lin CL，Liao LY，Liu CJ，et al.Hepatitis B genotypes and precore/basal core promoter mutants in HBeAg-negative chronic hepatitis B［J］.J Gastroenterol，2002，37(4):283-287.

Clinical investigation of association of mutations in the core promoter and precore region of HBeAg negative chronic hepatitis B

SUN Xiaohong*，LI Shuqin，WU Yuzhou，et al.*Division if Digestive Diseases，Wangjing Hospital of China Academy of Traditional Chinese Medicine，Beijing100102

ObjectiveTo investigate the association of mutations in the core promoter and precore region of HBeAg negative chronic hepatitis B.MethodsSerum HBeAg，HBC-DNA，mutations in the core promoter and precore region in 193 patients with chronic hepatitis B were detected using enzyme-linked mini-sequence assay kit and HBV core promote r mutation detection kit Results There were 123(63.73%)HBeAg-positive and 70(36.27%)HBeAg-negative patients.HBeAg-negative patients had significantly lower HBV DNA levels compared with the HBeAg-positive patients(mean 5.0 to 8.3 Log copies/mL，P＜0.05).The precore mutation rate was significant higher in HBeAg-negative patients than that in HBeAg-positive patients(76%to 30%，P＜0.05)but there was no significant difference on the core promoter mutation rate between HBeAg-negative and positive patients(51%to 30%，P＞0.05).In HBeAg-negative group，patients with precore or core promoter mutations had a lower serum HBV DNA level compared with that in the patients with wild type(P＜0.05)but in HBeAg-positive group there was no significant difference between the patients with mutation type and wild type(P＞0.05).ConclusionPrecore mutation may be associated with HBeAg seroconversion but core promoter mutation is not associated with it.The precore mutation and core promoter mutation cannot enhance virulence，and maybe not related to disease severity.

Chronic hepatitis B;Genetype;Precore gene;Core promoter

R373;R373.21;R392.11

A

1002-2619(2011)09-1424-02

△通讯作者:中国中医科学院望京医院脾胃病科，北京 100102

1 河北医科大学基础医学院病理生理教研室，河北 石家庄050011

2 河北医科大学第二医院心血管内科，河北 石家庄 050071

孙晓红(1974—)，女，主治医师，博士。从事消化内科临床工作。

2011-03-18)