杜郁，王丽，王丽非，司书毅，杨媛，洪斌

·论著·

以Apo A-I为靶点的基因表达上调剂筛选模型的建立

杜郁，王丽，王丽非，司书毅，杨媛，洪斌

目的建立靶向人 Apo A-I 转录调控序列的高通量药物筛选模型，用于筛选 Apo A-I 基因表达上调剂。

载脂蛋白 A-I； 转录启动子； 荧光素酶类； 药物评价，临床前

www.cmbp.net.cn 中国医药生物技术, 2011, 6(3):178-183

高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）水平降低是心血管疾病的独立风险因素，它和动脉粥样硬化疾病的发生存在明确的负相关关系[1]。研究发现，HDL-C 的水平每增加 1 mg/dl，心血管病发生的风险可降低 2％ ～3％[2]。随着研究的深入，目前倾向认为高密度脂蛋白（HDL）的心血管保护作用很大程度上依赖于它所介导的胆固醇逆转运（reverse cholesterol transport，RCT）过程，即 HDL 将胆固醇从周围组织（包括粥样斑块）转运到肝脏以胆酸形式代谢[3]。因此，提高和改善 HDL 水平与功能，有可能成为动脉粥样硬化治疗的新途径。

载脂蛋白 A-I（apolipoprotein A-I，Apo A-I）是 HDL 的主要结构蛋白和功能单位，与 HDL 的形成密切相关。Apo A-I 在血浆中的浓度与 HDL-C的水平相关，可通过多种机制发挥抗动脉粥样硬化作用[4]，有望成为动脉粥样硬化的治疗靶基因之一。通过对肝细胞中 Apo A-I 基因调控区缺失图谱和转基因鼠的研究发现，转录起点 –220 ～ –110 bp 的启动子区域存在几个重要的转录因子结合位点，包括 Site A（–214 ～ –192 bp）、Site B（–169 ～ –146 bp）和 Site C（–134 ～ –119 bp），对于维持肝细胞中 Apo A-I 的正常转录和表达是必需的[5]。本研究以上述Apo A-I 的启动子序列为靶点，利用报告基因体系，建立稳定转染细胞用于基因表达上调剂的高通量筛选。将 Apo A-I 基因上游的 –277 ～ +173 bp 片段克隆于荧光素酶报告基……