张玉佩 杨钦河 孔怡琳 谢 芳 杨环文 程少冰 冯高飞

(暨南大学医学院中医系,广东 广州 510632)

解耦联蛋白(Uncoupling Proteins,UCPs)是一种哺乳动物特有的、在褐色脂肪组织中特异表达的线粒体内膜蛋白质,具有调节质子跨膜转运的作用。目前共发现 5种不同的UCP家族成员,分 别为 UCP1、UCP2、UCP3、UCP4 和 UCP5〔1〕。 其中UCP2具有调节脂质代谢的作用,并受脂质的反馈调节,从而抑制肥胖或脂质代谢障碍时脂质在肝脏沉积,阻止肝细胞脂肪变性,在脂肪肝的发生过程中起重要作用〔2,3〕。三七总皂甙(PNS)为中药三七提取的有效活性成分,其主要成分为人参皂甙 Rb1、人参皂甙 Rg1、三七皂甙 R1等,具有显著的降脂、抗脂质过氧化、抗纤维化、改善微循环、保肝、调节机体免疫力等作用〔4～6〕。本实验从体外途径建立肝细胞的脂肪变性模型,通过观察 PNS对脂肪变性 L02肝细胞甘油三酯(TG)含量及 UCP2 mRNA表达的影响,探讨其对脂肪变性肝细胞的降脂调控机制。

1 材料与方法

1.1 材料 L02肝细胞株购自中山大学实验动物中心细胞库,PNS标准品(编号:870-200001)购自中国药品生物制品检定所,小牛血清购自北京普博欣生物科技有限公司,RPMI1640干粉、胰蛋白酶、二甲基亚砜(DMSO)、噻唑蓝(MTT)、台盼蓝均为美国 Sigma公司产品,油红 O染色试剂盒购自厦门信道生物技术有限公司,RNA提取试剂 TRIZOL、RT-PCR试剂盒均为日本 TAKARA公司产品,UCP2、β-actin引物均为上海英骏生物技术有限公司合成。美国Thermo公司CO2恒温培养箱、美国Thermo公司超速低温离心机,奥地利 TECAN公司 Tecan-safire2全波长多功能酶标仪,宁波新芝生物科技股份有限公司 JY96-Ⅱ超声细胞粉碎机,日本日立公司全自动生化分析仪,德国Leica公司 DMI 4000B倒置荧光显微镜,美国 BIO-RAD公司梯度 PCR仪、凝胶成像系统分析仪。……