刘宏，王延，2，朱刚，乌斯满江，彭飞，薛英，2，徐亚萍，黄炯，2*

(1.新疆天康畜牧生物技术股份有限公司，新疆乌鲁木齐，830032；2.新疆畜牧科学院兽医研究所，新疆乌鲁木齐 830032）

口蹄疫（FMD）是由口蹄疫病毒（FMDV）引起的偶蹄动物的急性、热性、高接触性传染病。由于猪、牛、羊等主要家畜均可感染此病，并能形成全球大规模流行，所以国际兽疫局（OIE）将该病列为A类家畜传染病之首。目前我国对牛羊口蹄疫的预防主要使用口蹄疫0型、亚洲I型二价灭活疫苗，疫苗的免疫效果是预防和控制口蹄疫流行的关键。本文探讨了液相阻断ELISA方法测定的免疫动物血清抗体滴度与攻毒保护效果的平行关系，试图对现行疫苗田间应用效果的评价方法进行评判。

一、材料与方法

（一）疫苗 新疆天康公司生产的口蹄疫O、Asia-1型二价灭活疫苗。

（二）动物 用液相阻断ELISA法检测血清抗体，滴度分别＜1:8的6月龄以上的健康易感牛用于试验。

（三）攻毒用强毒 口蹄疫疫苗效检用强毒，O型毒为OHM/02株，毒价为108.0ID50/0.2 ml，亚洲1型毒为Asia-1/GSZY/06株，毒价为106.5ID50/0.2 ml。

（四）口蹄疫液相阻断ELISA试剂盒 购自兰州兽医研究所。

（五）免疫效力检测 按照OIE推荐的PD50试验检验疫苗的效力。

（六）免疫接种 每批疫苗分为1头份、1/3头份和1/9头份3个免疫剂量组，每个剂量组分别于颈部肌肉注射10头牛，攻毒时均分为O型和亚洲1型组（各5头牛），另设O型和亚洲1型对照组各2头牛。

（七）攻毒和结果判定 免疫21 d后，O型和亚洲1型组的免疫牛连同对照，舌上表面两侧分两点皮内分别注射牛口蹄疫病毒O型强毒和Asia-1型强毒，每点0.1 ml（共0.2 ml，含 10 000ID50）。连续观察10 d，对照动物3蹄或3蹄以上出现水泡，试验成立。免疫牛仅在舌面出现水泡或溃疡，而其它部门无病变时判为保护，除舌面以外任一部位出典型口蹄疫水泡或溃疡时判为不保护。

表1 O型抗体滴度与牛免疫保护率的相关性

表2 Asia-1型抗体滴度与牛免疫保护率的相关性

（八）血清抗体检测 攻毒前采血分离血清，参照液相阻断ELISA试剂盒的方法检测和判定。

二、实验结果

（一）数据处理和分析结果 将试验结果中的O型、Asia-1型抗体滴度 为1.2lg(1:16)至2.1lg(1:128)之间的数值对应的免疫保护牛数、攻毒后发病牛数、保护百分率及应用生物统计方法换算出的概率单位列于表1、表2。从表1中可以看出，口蹄疫O型和攻毒保护百分率(概率单位)之间呈正相关关系。经统计学t检验证明，P<0.05，相关系数为0.829；从表2可以看出，口蹄疫Asia-1型和攻毒保护百分率(概率单位)之间呈正相关关系。经统计学t检验证明，P<0.01，相关系数为0.95，说明抗体滴度和攻毒保护百分率(概率单位)之间存在着显著的正相关性

（二）回归分析结果 根据所得到的概率单位数据与口蹄疫O型、Asia-1型抗体滴度对数进行统计学回归分析，并分别计算出回归方程O 型 为 Y=0.990X+3.456，Asia-1型为Y=2.043X+1.746，结果见图1、图2。从图1、图2可以看出，抗体滴度对数和保护百分率(概率单位)两者之间的关系是线性回归，进一步说明液相阻断ELISA抗体滴度和攻毒保护百分率(概率单位)之间存在着显著的正相关性。

图1 O型抗体滴度对数和保护百分率(概率单位)两者之间的线性回归关系

图2 Asia-1型抗体滴度对数和保护百分率(概率单位)两者之间的线性回归关系

三、讨论

从概率分析可以看出，O型抗体滴度在 1.35（1:22）～ 1.95（1:90)有50%牛免疫保护，Asia-1型抗体滴度在1.65(1:45)～1.80(1:64）有50%牛免疫保护，以上结果符合ELISA试剂盒介绍的，抗体效价在1:22～1:90时，可获得50%的保护的结论。而O型抗体滴度在≤1.2 lg（1:16）有29%牛免疫保护， 在 ≥ 2.1 lg（1:128)有 78%牛免疫保护；Asia-1型抗体滴度在≤1.2 lg（1:16)有24%牛免疫保护，在≥2.10 lg（1:128)有85%牛免疫保护；与ELISA试剂盒介绍的，抗体效价≥1:128时，可获得99%保护，抗体效价≤1:16时，不保护的结果相差较大。对于有的牛抗体水平较低，对攻毒仍有较好的保护，不引起发病，可能与其存在较高的细胞免疫有关等。造成这种差距的原因可能有许多，还需要进一步研究。

McCullough等认为，在用血清抗体效价来判定保护力时，二者间存在一个灰色区域（Grey Zone）,当抗体效价落于这一区域时，总是无法判定动物是否能被保护。对这些现象目前无法做出科学的解释。可以肯定还有其他影响因素。中和抗体的数量（或滴度）只是反映动物保护力的一项指标，但不应是惟一指标，抗体的亲和力和中和抗体对吞噬细胞的调理作用也是影响保护力的重要因素。

尽管存在一些数据的特例，但统计学分析结果表面液相阻断ELISA抗体滴度的对数和保护百分率(概率单位)两者之间的关系呈线性回归，存在着显著的正相关性，用液相阻断ELISA方法评判群体的免疫效果是完全可行的。

（略）