温丽娟，王桂华，侯喜林，余丽芸，，王萌

（1.黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院，大庆163319；2.黑龙江八一农垦大学动物科技学院）

产肠毒素性大肠杆菌（Enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC）是引起仔猪腹泻疾病的主要病原菌之一[1-3]，给我国乃至全世界畜禽养殖业造成了巨大的经济损失。疫苗接种是预防该病的主要措施[4]，目前，国内外使用的接种疫苗主要有灭活疫苗和弱毒疫苗，但灭活疫苗免疫原性差，而弱毒疫苗存在接种后动物机体排散病毒、病毒毒力返强等缺陷。针对ETEC主要经消化道和呼吸道黏膜感染的特点，研制能有效的刺激黏膜免疫系统产生局部免疫应答，进一步引起全身性系统免疫反应的新型疫苗，对该病的防治具有重要意义。

乳酸菌是人和大多数动物肠道内的常见细菌，被公认为安全级（generally recognized as safe，GRAS）微生物[5]，具有免疫佐剂、吸附黏膜、抗胆汁酸等能力，而且乳酸菌本身又具有低免疫原性，因此，以乳酸菌为载体作为外源基因的传递和表达系统研制口服疫苗，具有重要开发前景[6-12]。本研究选择能在肠道中定植的食品级微生物干酪乳杆菌作为递呈抗原物质的载体，采用一种新型的表面展示系统，利用多聚谷氨酸跨膜蛋白pgsA的锚定机制[13-15]，构建了表达K99-K88-LTB融合蛋白的重组干酪乳杆菌表达系统，并通过Western blot、间接免疫荧光技术及流式细胞术对表达于菌体表面的融合蛋白进行了鉴定。

1 材料和方法

1.1 菌株和质粒

产肠毒素性大肠杆菌标准菌株C83912由黑龙江八一农垦大学基因工程实验室保存；……