金甲正，符亚原，黄大鹏，张虎

（黑龙江八一农垦大学动物科技学院，大庆163319）

猪生长激素（porcine Growth hormone，pGH）是由猪脑垂体前叶嗜酸性细胞合成分泌的单链多肽类激素。Thomsen用原位杂交法和辐射杂种板将pGH基因座定位在12号染色体短臂1区1带[1]。Yerle等人用高分辨率G带染色体原位杂交将pGH基因定位于12 p1.2-p1.5区域上[2]。pGH基因的全基因序列首先由Vizer等人确定[3]，该基因全长2 231 bp，由5个外显子和4个内含子组成。近年来，国内外的科研工作者已经对pGH基因的结构做了大量的工作，但pGH基因研究的主要工作仍集中在多态位点的寻找，且研究的区域主要集中在5＇端至外显子3起始处[4-6]，而且在三江白猪种群中的多态性研究尚未见报道。本试验采用PCR-RFLP技术检测三江白猪群体中pGH基因第2外显子的多态性，为今后研究瘦肉型猪种的基因型特征与生长性能的关系提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

样品来源于黑龙江省大庆市三江白猪原种猪场，健康仔猪共121头。取尾组织洗净置于灭菌的EP管中，-70℃保存备用。

1.2 试验方法

1.2.1 基因组DNA提取

取1 g左右的组织剪碎放入1.5mL的EP管中，加入2.5mL裂解液和5μL蛋白酶K，置于50℃水浴消化过夜。12 000 rpm，离心10min，取上清液，用等体积的混合酚和氯仿各抽提一次，用等体积的异丙醇沉淀DNA，再用70%的乙醇洗脱2次，最后用核酸真空干燥器烘干，加入150μL TE（pH=8.0）溶解过夜，-20℃保存。

1.2.2 引物及PCR

参照 GenBank中公布的 pGH基因序列（EU 684 437），用Primer 5.0软件设计PCR引物，由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。上游引物：5＇-GGAAGGAGAAGGGACAGGG-3＇；下游引物：5＇-TGGCAAATAGGCTGGACAA-3＇。

PCR反应体系：10×Buffer 3.00μL；dNTP 2.00μL；上游引物 0.50μL；下游引物0.50μL；模板DNA 1.00μL；DNA Taq酶0.25μL；加水至25.00μL。……