段发兰 李亚新 胡筱梅 李 毅

活动期类风湿关节炎患者血清及关节液白细胞介素-17水平变化及与有关实验室指标的关系

段发兰1李亚新2胡筱梅1李 毅1

本文2010-08-30收到,2010-10-22修回,2010-11-11接受

类风湿关节炎(RA)的发病机制尚不清楚,多基因和环境因素共同诱发病理性自身免疫反应,导致RA表现为以破坏性多关节炎和不同的关节外炎症病变为特征,研究发现白细胞介素-17(IL-17)是一种重要的前炎症细胞因子,在RA的发病和骨侵蚀方面发挥着重要作用[1]。本文应用酶联免疫法(ELISA)检测RA患者外周血和关节液中IL-17水平,进一步分析其与RA实验室指标超敏C反应蛋白(hs-CRP)、血沉(ESR)、类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸抗体(抗CCP抗体)的关系及临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般临床资料

本文患者均来自在东风汽车公司总医院就诊的活动期 RA患者,共 50例,其中男 10例,女40例,年龄20～72岁,病程1～35年。所有病例皆符合1987年美国风湿病协会(ACR)修订的RA诊断分类标准[2],且病情处于活动期。RA病人活动期判别标准[3]:(1)关节肿胀≥6个;(2)关节压痛≥6个;(3)晨僵≥45分钟;(4)血沉(ESR)≥30mm/1h;(5)hsCRP大于正常值上限的1.5倍。RA病人存在(1)+(2)同时伴有(3)、(4)、(5)三项的任何两项被认为处于活动期;不同时满足(1)+(2)或(3)、(4)、(5)仅一项,被认为处于静止期。

1.2 检测方法

1.2.1 标本采集与分组:收集50例血清标本(血清组)其中15例关节液标本(关节液组),30例正常健康人外周血作为对照组。抽取各组静脉血3m l自行凝固,肝素抗凝的关节滑液经透明质酸酶(10U/m l)37℃处理15分钟所有标本,1 000r/min离心10 m in,收集上清。分装后-80℃冷冻保存备用。

1.2.2 指标测定:RF采用免疫透射比浊法,hs-CRP用颗粒增强免疫透射比浊法,采用美国生产的ABBOTT AEROET全自动生化分析仪检测,试剂来自上海申能—德赛诊断系统有限公司。ESR使用天津市亚坤电子科技发展有限公司生产的EHK红细胞沉降压积仪测定。IL-17采用ELISA,试剂盒由美国RrapidBio Lab公司生产;抗CCP抗体采用ELISA,试剂盒由上海富纯中南生物技术有限公司提供,按说明书操作。

1.3 统计学处理

实验数据用SPSS 11.5软件进行统计学分析。计量资料用均数±标准差(±s)表示,两组均数比较采用t检验。两因素之间的相关性用Pearson相关分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 活动期RA患者外周血清和关节液IL-17水平变化

IL-17水平分析显示血清组明显高于对照组,关节液组明显高于血清组,结果见表1。

表1 各组IL-17及有关实验室指标检测水平比较(±s)

表1 各组IL-17及有关实验室指标检测水平比较(±s)

注:与对照组比较,1)P＜0.01;与血清组比较,2)P＜0.01

组 别 n 年龄 性别(男/女) IL-17(pg/m l)对照组 30 43.56±7.35 10/20 67.36±7.56血清组 50 50.99±15.42 13/37 113.23±25.331)关节液组 15 49.72±11.09 5/10 142.36±45.991)2)

2.2 活动期RA患者血清及关节液IL-17水平与有关实验室指标的相关性分析

Pearson相关分析发现 RA患者血清IL-17水平与其血清中炎症急性期蛋白(hs-CRP、ESR)及自身抗体(RF、CCP)均呈正相关,其关节液中IL-17与hs-CRP、ESR水平呈正相关,与 CCP、RF无明显相关性。见表2。

表2 活动期RA患者血清及关节液IL-17水平与实验室指标的相关性

3 讨 论

RA病理特征主要是炎症细胞的浸润和滑膜组织的增生、肥厚,以及骨损伤。在病变滑膜下层可以发现大量淋巴细胞呈弥漫性分布或聚集,如同淋巴滤泡;其中大部分为CD4+T细胞。IL-17主要由这些活化的CD4+T细胞产生,并能诱导活化T细胞,促进滑膜细胞分泌多种细胞因子如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-18、IL-6 和 IL-8 等;IL-17还可以引起中性粒细胞蛋白酶和髓过氧化物酶等蛋白水解酶活性增高,通过诱导滑膜细胞和软骨细胞表达金属蛋白酶,使蛋白多糖分子断裂,破坏软骨组织,刺激破骨细胞的生成,在骨质破坏反应中对破骨细胞的活化和骨质吸收发挥重要作用。本文检测了活动期RA患者血清及部分患者的关节液中IL-17水平,结果显示RA患者组较正常对照人群血清IL-17浓度显著增高;关节液中更高(P＜0.01)。这与国内外的研究一致[4、5]。动物研究发现IL-17缺陷小鼠或用IL-17受体拮抗剂处理RA小鼠模型可减轻关节症状[6],提示IL-17在RA的致病机制中起作用。

CCP、hsCRP、ESR及 RF是RA重要的诊断和预后判断指标,被广泛用于RA病情活动性评估、关节骨侵蚀破坏等临床及研究工作中。本文对活动期RA患者外周血IL-17与这些指标进行了相关性分析。结果表明RA患者外周血IL-17与hs-CRP及ESR水平呈明显正相关(P＜0.01),提示疾病活动度越高的患者IL-17水平升高越明显,可能IL-17作为反映RA病人炎症活动的新指标之一。RF是RA患者血清中存在的对变性IgG产生的自身抗体,可分为 IgM、IgA、IgG型,本文检测的是IgM型,其水平变化与IL-17水平呈正相关。本检测分析还发现,活动期RA患者外周血IL-17与抗CCP抗体水平亦呈正相关,K root等[7]通过6年的影像学随诊观察发现抗CCP抗体阳性的患者更容易出现严重的关节破坏,Bas等[8]也报道抗CCP抗体与RA骨侵蚀具有相关性,因此认为,IL-17水平可能与RA进展相关。但也有不一致的报道,如陈海燕等[9]报道外周血血清IL-17与RA临床指标ESR、RF、CRP无相关性。本文得出相反结论的原因可能与实验所选择的都是活动期RA患者,并且CCP阳性率占94%有关。但细胞因子与自身抗体之间关系的机制目前尚不明确。笔者进一步将关节液IL-17水平与 ESR、RF、hs-CRP、CCP 作相关分析,结果提示关节液IL-17水平与血液ESR和hs-CRP呈显著正相关,而与RF、CCP无明显相关性。但这一初步结果的样本太小,需在后续实验中,收集更多标本进行验证。

综上所述,Th17细胞相关细胞因子IL-17在RA外周血及关节局部呈过度表达,可能在RA的免疫发病机制中起重要作用。同时,也有可能作为临床判断RA活动性的指标之一,成为RA生物治疗的新靶向。

本文第一作者简介:

段发兰(1972～),女,汉族,主管技师

1 M clnncs IB,Licw FY.Cytokine netw ork s-tow ards new therapies for rheumatoid arthritis.Nat C lin Praet Rheumatoid A rth ritis,2005,1(1):31～39.

2 林文棠,朱 平.临床免疫学.西安:第四军医大学出版社,2002:24～32.

3 蒋 明,David YU,林孝义等主编.中华风湿病学.北京:华夏出版社,2004:760～828.

4 K im HR,Cho M L,K im KW,eta1.Up-regu lation of IL-23p19 exp ression in rheumatoid arth ritis synovial fibroblasts by IL-17 th rough PL3-kinase-.N F-kappaB-and p38 MAPK-dependent signaling pathw ays.Rheumatology(Oxford),2007,46(1):57～64.

5 高文风,王晓东,张 明,等.类风湿关节炎患者IL-17水平的变化.潍坊医学院学报,2008,30(3):219～220.

6 Bush KA,Farmer KM,Walker JS,et a1.Reduction of join t inflamm tion and bone erosion in rat adjuvant arth ritis by treatm ent with intedeukin-17 recep tor lgGIFc fusion p rotein.A rth ritis Rheum,2002,46(3):802～805.

7 K root EJ,Jone AW,Leeuw en MA,et al.The p rognostic value of anti-cyclic citrullinated peptide an tibody in patients with recent-onset rheum atoid arth ritis.A rth ritis Rheum,2000,43(8):1 831～1 835.

8 Bas S,Perneger TY,T iercy JM,et al.Diagnostic tests for rheumatoid arth ritis:comparison of an ti-cyclic citru llinated peptide antibodies and IgM rheumatoid factors.Rheum atology,2002,41(7):809～814.

9 陈海燕,韩 捷,范 璐,等.类风湿关节炎患者 Th17细胞相关细胞因子的表达及临床意义.同济大学学报(医学版)2009,30(4):61～63.

活动期类风湿关节炎患者血清及关节液白细胞介素-17水平变化及与有关实验室指标的关系

段发兰,李亚新,胡筱梅,等/东风汽车公司总医院,湖北医药学院附属东风医院检验科,十堰442008

目的:分析类风湿关节炎(RA)患者外周血和关节液中 T辅助细胞 17(Thl7)相关细胞因子白介素-17(IL-17)水平,探讨其在RA中的变化特点及与实验室指标的相关性。方法:用ELISA检测50例活动期 RA患者血清和其中15例关节液以及30例正常人血清IL-17水平。同时测定RA患者血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)、血沉(ESR)、类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸抗体(抗CCP抗体)水平。结果:RA患者外周血血清IL-17水平明显高于健康对照组(113.23±25.33pg/ml VS 67.36±7.56pg/m l,P＜0.01),而其关节液IL-17水平明显高于血清水平(142.36±45.99pg/ml VS 113.23±25.33pg/m l,P＜0.01)。血清 IL-17水平与 hs-CRP、ESR、RF、抗CCP抗体均呈正相关。关节液IL-17水平与hs-CRP、ESR均呈显著正相关,与RF、抗CCP抗体无相关。结论:IL-17可能通过促炎作用,参与RA的免疫致病机制。

The Clinical Significance of Serum and Synovia l Fluid Interleukin-17 in Rheumatoid Arthritis

Duan Falan,Li Yaxin,H u Xiaomei,et al/Department of Clinical Laboratory,General Hospita l of Dongfeng Automobile Company,Shiyan 442008

Rheumatoid arthritis;IL-17;Relation

R446.62

A

1005-1740(2011)01-0042-03

东风汽车公司总医院,湖北医药学院附属东风医院,邮政编码 十堰442008;1检验科;2干部科

Objective:To analy sis the levelof T helper cell17(Th17)cytokines interleukin-17(IL-17)in the peripheral blood and synovial fluid of rheum atoid arth ritis(RA)patien ts,and investigate the correlation of other characteristics and labo ratory indexes.Method:ELISA w asused to detect the serum IL-17 levels in 50 active RA patients,15 cases synovial fluid of RA patients and 30 normal cases.The serum high sensitivity C-reactivep rotein(hs-CRP),ery th rocyte sedim entation rate(ESR),rheumatoid factor(RF)and an ti-cyc lic citrullinated(CCP)antibodiesw ere also measu red.Results:The serum IL-17 levels in RA patients w ere significantly higher than the controlg roup(113.23±25.33pg/m l,67.36±7.56pg/m l,P＜0.01).The IL-17 level in synovial fluid of RA patients w ere significan tly higher than in serum(142.36±45.99pg/m l,113.23±25.33pg/m l,P＜0.01).IL-17 levels in serum and hs-CRP,ESR,RF,CCPw ere positively correlated.IL-17 levels in synovial fluid and hs-CRP,ESR showed a significant positive correlation.Conclusion:The over-expression of IL-17 in active RA blood and joint local suggest that IL-17may play a proinflammatory role through participation in the pathogenesis of RA.

类风湿关节炎 白细胞介素-17 关系