孙英杰,陈鸿军,詹 媛,于 洋,仇旭升,宋翠萍,于圣青,丁 铲

(中国农业科学院上海兽医研究所,上海闵行 200241）

新城疫(ND）是由新城疫病毒(NDV）引起的一种禽类急性、高度接触性传染病,一直是危害世界养禽业的最主要病患之一。根据系统发育进化树分析可将不同基因组长度的NDV病毒分为两个群,即ClassⅠ(15 198 nt）和 ClassⅡ(15 192 nt或15 186 nt）[1]。于圣青等研究发现一株从野生水禽分离到的非致病性NDV毒株,在SPF鸡体内经过9次气囊接种(9a）和5次脑内接种(5b）传代后,演变为速发型NDV,从而证实NDV弱毒株可以在鸡体内经传代后发生毒力变异[2]。

Class INDV基因组为单链、不分节段的负链RNA,编码6种结构蛋白,即核衣壳蛋白(NP）、磷蛋白(P）、基质蛋白(M）、融合蛋白(F）、血凝素神经氨酸酶(HN）和大分子蛋白(L）[2]。其中,基质蛋白(m atrix p rotein）基因全长 1 241 bp,编码364个氨基酸,位于病毒囊膜内层,构成病毒囊膜的支架,高度保守,在RNA的合成和病毒的自身装配上起重要的作用[3]。本试验拟通过原核表达M蛋白,研制特异性抗体,分析M蛋白在Class INDV病毒感染细胞过程中,M蛋白的亚细胞动态定位情况,旨在为深入开展M蛋白与病毒增殖、宿主相互作用机制的研究工作奠定基础。

1 材料与方法

1.1 病毒 15代NDV分离株由本室保存。由于圣青将一株NDV无毒株(Goose/A laska/415/91）在鸡气囊中传代9次(9a）,再在脑内传代5次(5b）,分离所有代次的毒株。本试验中试验对象为9a5b株(强毒）。

1.2 载体和主要试剂 RPMI 1 640培养基、澳洲源胎牛血清购自Gibco公司;辣根过氧化物酶(HRP）标记羊抗鼠IgG、荧光素(FITC）标记山羊抗鼠IgG、胰蛋白酶购自 Sigma公司;预染蛋白质Marker购自 MBI公司;DAPI、β-actin单抗购自碧云天生物技术研究所;其他生化试剂分析纯。……