张伟 于爽 孙晶 张云丽 于俊生

(山东省青岛市海慈医疗集团 山东青岛 266033)

和肾络颗粒是我院中药自制制剂,由赤芍、白术、制大黄等八味中药组成,具有和络泄浊功效;用于早、中期慢性肾功能衰竭等病症,疗效确切。本文对该制剂主要功效成分芍药苷含量进行含量测定方法研究,为制备工艺和质量标准制定提供依据。

1 主要仪器、试剂与药材

Agilent 1100型高效液相色谱仪,芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所)(批号:110736-200320),色谱纯乙腈(美国天地试剂公司),乙醇为药用,水为重蒸馏水,其余试剂均为分析纯。和肾络颗粒由本院制剂室提供,阴性对照品实验时先制,药材购自本院中药房。

2 方法与结果

(1)色谱条件:色谱柱:DiamonsilC18柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相:乙腈-水(16∶84)为流动相,流速:1mL·min-1,柱温:25℃,检测波长:230nm。

(2)对照品溶液的制备:精密称取芍药苷对照品5.2mg,加甲醇定溶于10mL容量瓶中,配成0.52mg·mL-1的对照品溶液。

(3)供试品溶液的制备:取和肾络颗粒10g,研细,精密称重,置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇溶液25mL,称重,浸泡1hr,超声处理30min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液10mL,挥干,残渣用1mL50%甲醇溶解,即为供试品溶液。

(4)阴性对照溶液的制备:取不含赤芍的处方比例量的其他药材,按制备工艺制备成阴性对照品颗粒,照“2.3”项方法制成阴性对照溶液。

(5)系统适应性试验:按“2.1”项下条件,将对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液分别进样10μl进行测定,结果对照品溶液和供试品溶液色谱图在相应的保留时间处均有最大吸收峰,供试品溶液相邻峰无干扰;阴性样品色谱图中,在与对照品色谱相应的保留时间处无色谱峰出现,表明该制剂中其他组分对芍药苷的测定无干扰。

(6)方法学考察:①线性关系考察:精密吸取浓度为0.52mg·mL-1的对照品溶液0.5、1、2、4、6、8、10μL进样,测得峰面积,以对照品含量为横坐标,峰面积为纵坐标,计算回归方程为(Y=1189X+35,r=0.9998),表明芍药苷进样量在0.26～4.68μg范围内呈良好的线性关系。②精密度试验:精密吸取对照品溶液(0.52mg·mL-1)2μL,连续进样5次,测定芍药苷峰面积RSD为1.60%(n=5)。精密度良好。③重复性试验:精密称定研细的同一批(070901)样品粉末10.0g共5份,按“2.3”项方法制备5份样品溶液,各吸取20μL进样测定,阿魏酸含量RSD值为0.99%(n=5)。表明方法重复性较好。④稳定性考察:精密吸取对照品溶液(0.52mg·mL-1)2μL,分别于配制后0、2、4、8、16、24h进样,结果峰面积RSD为1.81%,表明供试品溶液在24h内稳定。

3 结语

高效液相色谱法含量测定研究,成功的关键是流动相的选择,它要求在某一检测波长下,样品液和肾络颗粒有8味中药组成,化学成分复杂,检测易受干扰,参照有关文献,我们先后对比试验了乙腈∶水=16∶84[1～3],甲醇-水(32∶68)[4],甲醇-水(25∶75)[5]等流动相,结果流动相为乙腈∶水=16∶84的样品液色谱图有较好的峰型和分离度,同等条件下阴性对照液无吸收峰。所以确定乙腈∶水=16∶84为芍药苷含量测定的流动相。

本实验建立的高效液相色谱法测定和肾络颗粒中芍药苷的含量,方法简便、准确,分离效果好,无干扰,为制备工艺研究和成品质量标准评价提供一种有效可行的方法。

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