王绍美

（中国农业科学院烟草研究所，青岛 266101）

蛋白质组（proteome）最初指细胞内全部蛋白质的存在及其活动方式，后引申指一个基因组编码的全部蛋白质。蛋白质组研究是生命科学研究进入后基因组时代的里程碑，也是后基因组时代生命科学研究的核心内容之一和功能基因组学研究的新兴学科、热点领域。蛋白质组学研究方法主要是基于蛋白质样品的分离、蛋白质的鉴定及蛋白质间的相互作用等技术。

1 蛋白质组学研究方法

1.1 蛋白质的分离技术

用于蛋白质分离的技术有双向电泳（two-dimensional electrophoreisis,2-DE）、荧光差异双向凝胶电泳（two dimensional fluorescence difference gel electrophoresis,2D-DIGE）、高效液相色谱（RP-HPLC）、毛细管电泳（capillary electrophoresis,CE）、多维液相色谱（MDLC）等技术。其中最主要的技术是双向电泳和高效液相色谱。2-DE基本原理是根据蛋白质等电点和分子量大小不同，先后在两个方向上分离蛋白质复杂组分[1]。这种技术具有分辨率和灵敏度较高，可用于计算机定量分析差异表达蛋白质，用高灵敏度微量化学方法较易对2-DE胶上的分离蛋白质进行鉴定和表征的特点，因此，目前仍是蛋白质分离的核心技术，适宜于进行比较蛋白质组学分析。该技术的缺点是疏水性蛋白（如膜蛋白）难溶于样品缓冲液；高分子量蛋白、极酸和极碱性蛋白易在电泳中丢失；低丰度（拷贝数小于1000）蛋白无法检测等。RP-HPLC作为蛋白质分离和纯化的最常用方法，一般是将液相色谱分离技术与串联质谱联用，首先酶解混合蛋白，再经过适当的色谱分离，并通过串联质谱分析肽段、鉴定蛋白。……