刘振玉 刘升 黄亮

南昌大学第一附属医院急诊科，△胸心外科，江西 南昌 330006

尾加压素Ⅱ在非小细胞肺癌中的表达及其意义的探讨

刘振玉 刘升△黄亮

南昌大学第一附属医院急诊科，△胸心外科，江西 南昌 330006

尾加压素Ⅱ； 非小细胞肺癌； 酶联免疫吸附试验

尾加压素Ⅱ(urotensin-Ⅱ，U-Ⅱ)，是迄今为止发现的最强缩血管活性肽，其缩血管效应比内皮素强16倍之多。U-Ⅱ在动脉硬化、心力衰竭等心血管疾病、肾脏及糖尿病等疾病过程中发挥重要作用［1-2］。除缩血管活性外，U-Ⅱ还是一种具有丝裂原样作用的自分泌/旁分泌生长因子［3］，在肿瘤的发生、发展过程中发挥着一定的作用。有关U-Ⅱ基因及其表达产物在肺癌中的表达及其临床意义的研究，虽有国外少数报道，但尚无定论［4］。本实验采用酶联免疫吸附试验，以非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)手术切除标本、正常肺组织为研究对象，探讨U-Ⅱ在NSCLC中的表达状况，及U-Ⅱ的表达水平与肺癌发生、发展和病理类型及临床分期的关系。

1 资料和方法

1.1 标本与试剂

肺癌标本取自南昌大学第一附属医院肺癌手术切除患者63例，其中男性50例，女性13例，年龄33～72岁，平均50.5岁；经病理证实鳞癌33例，腺癌30例，其中高分化鳞癌8例，中分化鳞癌13例，低分化鳞癌12例，高分化腺癌7例，中分化腺癌14例，低分化腺癌9例；临床分期为Ⅰ+Ⅱ期35例，Ⅲ+Ⅳ期28例；无远处转移35例，有远处转移28例。另取离肿瘤组织5 cm以上的肺组织作为对照的正常肺组织，共31例；每份标本均取3份，放入液氮中保存。主要试剂：U-Ⅱ ELISA试剂盒购自上海继锦化学科技有限公司。

1.2 方法

酶联免疫吸附试验检测NSCLC、正常肺组织中U-Ⅱ的含量(ng/mL)。操作步骤如下：标本收集及处理：新鲜取的肺癌、正常肺组织用PBS洗3次，1 g肿瘤或1 g正常组织放入1 mL PBS中，并在小玻璃皿中匀浆，组织匀浆后12 000 r/min离心1 min，离心后收集上清液备检查，于-20 ℃保存。

检测准备工作：⑴提前20 min从冰箱中取出试剂以平衡至室温。将20倍的浓缩洗涤液放至37 ℃温箱，30 min，用双蒸水稀释。⑵用标准品稀释液根据标准品的初始浓度进行系列稀释，每一稀释要混匀，未用完的标准品立即放入-20 ℃保存，已稀释的标准品未用完的丢弃。⑶U-Ⅱ检测，从已平衡至室温的密封袋中取出所需板条，其他板条密封放回2～8℃。加入标本和已稀释的不同浓度的标准品各100 μL至相应孔中，振荡混均后置于37 ℃水浴中温育60 min。洗板，甩尽孔内液体，每孔加洗涤液350 μL，静止30 s后甩尽液体，在厚迭吸水纸上拍干，重复5次。⑷加入100 μL辣根过氧化酶标记的二抗于各孔，37 ℃温育，60 min。洗板同⑶。⑸每孔加底物OPD各50 μL，避光37 ℃，15 min。⑹每孔加终止液1 N HCL 50 μL。⑺在Vmax 酶联分析仪检测各孔400 nm处的D值标准曲线由仪器完成。

1.3 统计学处理

数据均以表示，组间对比进行方差分析或四方格表精确概略法，数据处理由第三军医大学统计教研室《数理统计程序包》处理，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 NSCLC组织及正常肺组织U-Ⅱ含量比较

NSCLC组织U-Ⅱ含量(542.40±41.81)ng/mL，明显高于正常肺组织(17.13±3.21)ng/mL，差异有统计学意义(P＜0.01)。

2.2 肺癌组织类型U-Ⅱ含量比较

鳞癌患者U-Ⅱ含量(498.50±39.81)ng/mL与腺癌患者(562.00±42.20)ng/mL比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。

2.3 临床病期与U-II表达水平的关系

Ⅰ+Ⅱ期患者U-Ⅱ含量为(256.00±7.65)ng/mL，明显低于Ⅲ+Ⅳ期患者的(372.50±19.74)ng/mL，差异有统计学意义(P＜0.05)。

2.4 肺癌组织U-II含量与肺癌转移的关系

33例鳞癌患者有21例发生远处转移，U-Ⅱ含量为(569.50±70.36) ng/mL，12例无远处转移U-Ⅱ含量为(252.50±17.39) ng/mL；30例腺癌患者有22例发生远处转移，U-Ⅱ含量为(596.50±42.30) ng/mL，8例无远处转移U-Ⅱ含量为(283.40±18.48) ng/mL，可见有远处转移的肺癌患者U-Ⅱ含量明显高于无远处转移的肺癌患者，差异有统计学意义(P＜0.05)。

3 讨 论

U-Ⅱ是一种强大的细胞有丝分裂促进剂，像其他促有丝分裂的肽类激素一样，如肾上腺髓质素和内皮素-1，能够以自分泌/旁分泌的方式，促进肿瘤细胞异常增殖、血管生成、抑制肿瘤细胞分化，在肿瘤的发生、发展、侵袭及转移中起重要作用。有关U-Ⅱ在肿瘤中的表达，国内外近年陆续有报道［5-7］。有学者用反向PCR方法研究发现人类多种肿瘤细胞中均有U-Ⅱ及其受体mPNA的表达，如T98G恶性胶质细胞瘤、EMR-32成神经细胞瘤、NB69成神经细胞瘤、BeWO绒毛膜上皮癌、SW-13肾上腺皮质肿瘤、DLD-结肠腺癌及子宫颈细胞癌。除NB69成神经细胞瘤外，其余9种瘤细胞株均表达U-Ⅱ mRNA，而U-Ⅱ受体mRNA在7种肿瘤细胞均有表达。通过放射免疫分析法证实，在上述7种肿瘤细胞中SW-13肾上腺皮质肿瘤细胞培养的上清液中存在U-Ⅱ的免疫反应。Eddahibi等［8］研究发现U-Ⅱ在肾癌细胞中的免疫活性呈中度表达。在肾透明细胞癌组织及血管中也有中等量U-Ⅱ表达，而癌周炎性细胞中几乎无表达，据此推测肾肿瘤的发生、发展与U-Ⅱ有关。Takahashi等［9］检测出U-Ⅱ受体在横纹肌肉瘤中的表达，人类U-Ⅱ可抑制去除血清和肿瘤坏死因子诱导的内皮凋亡。本研究采用酶联免疫吸附试验，对63例肺癌手术切除标本及31例离肺癌组织边缘5 cm以上的肺组织U-Ⅱ的含量进行了检测。结果显示，U-Ⅱ在肺癌组织中含量明显增高，差异有统计学意义(P＜0.01)。同时还发现各病理类型肺癌U-Ⅱ含量差异无统计学意义(P＞0.05)，故肺癌组织中U-Ⅱ水平与肺癌病理类型无关。本研究还显示Ⅰ～Ⅱ期肺癌组织中U-Ⅱ含量明显低于Ⅲ～Ⅳ期肺癌组，差异有统计学意义(P＜0.05)。另外，有远处转移的晚期肺癌患者U-Ⅱ含量明显高于没有远处转移的肺癌患者，提示肺癌组织中U-Ⅱ水平的增高与肺癌的恶性程度及临床预后有关。在恶性肿瘤的生长过程中，由于组织生长过快，必然造成组织严重缺氧。有研究报道，低氧可以促使肺组织中多种细胞合成分泌U-Ⅱ，低氧后血管巨噬细胞数量明显增多，且细胞内U-Ⅱ阳性反应明显增强，其分泌的U-Ⅱ亦可直接释放入血，因此血管巨噬细胞合成的U-Ⅱ是循环中U-Ⅱ的重要来源［10］。而肺癌本身属于缺氧肿瘤，随着恶性程度的增高及病情进展其缺氧程度加重，U-Ⅱ合成分泌亦增多，并可能通过旁分泌或自分泌的方式，作用于肿瘤细胞，直接或间接地维持和促进肿瘤细胞的生长，使癌细胞更有利于逃避免疫监视，从而使肿瘤更具侵袭性，更容易发生远处转移。但是U-Ⅱ在肿瘤的血管发生、发展过程中的机制，及其与其他影响因子之间的相互作用及具体作用机制尚需要进一步的研究探讨。

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10.3969/j.issn.1007-3969.2011.06.016

R734.2

A

1007-3639(2011)06-0499-02

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2011-06-01）