核酸提取方法的研究进展
2011-02-10杨莲茹吴绍强
中国动物检疫 2011年12期
关键词:方法
张 丽 ,杨莲茹 ,吴绍强
(1.内蒙古农业大学兽医学院,内蒙古呼和浩特 010018;2.中国检验检疫科学研究院,北京 100029)
核酸的分子生物学技术是进行病原微生物检测,物种鉴定,物种起源、多样性评估及其亲缘关系、系统进化等常用研究手段之一[1]。然而,能否提取出高质量的核酸分子则是核酸分子生物学试验中关键,提取方法的灵敏度、特异性也将直接关系到后续试验的成败。
1869年,瑞士医师Friedrich Miescher首例成功的进行了核酸提取[2]。起初,他关注于组成白细胞各种蛋白质,并指出蛋白质是细胞质的主要成分。但在随后的测试试验中发现,当加入酸性溶液时溶液中生成一种沉淀物,再加入碱性溶液时沉淀继而溶解消失。Miescher首例提取出粗糙的DNA,Miescher成功从细胞中提取出DNA后,一些研究者纷纷效仿,并在材料、试剂的应用上进行了不断的探索,由此发展了许多核酸的生物分子提取技术。现如今,从硫氰酸胍盐-苯酚-氯仿提取法到柱纯化技术,已被广泛地用于DNA和RNA的提取。
核酸提取的关键在于组织细胞的裂解和核酸纯化两大步骤,本文据此对核酸提取的研究进展进行分析和讨论。
1 组织细胞裂解方法
组织细胞裂解提取核酸的方法主要包括胍盐裂解法、碱裂解法、CTAB裂解法以及酚抽提法等。
1.1 胍盐裂解法
胍盐是蛋白强变性剂,核酸提取一般采用高浓度的胍盐来裂解细胞,促使核蛋白体解离,同时高浓度的胍盐能使细胞内核酸酶失活,使释放出的核酸不被降解。1977年,Ulrich 等[3]首次使用异硫氰酸胍从总RNA中分离纯化出mRNA。……
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