姜海燕

浅谈微生物检测中培养基的质量控制

姜海燕

培养基的质量是微生物检测工作的基础，事关检测结果的准确性、可靠性。本文针对微生物检验中培养基的制备及使用过程中存在的问题，从培养基购置、贮存、制备、性能测试等方面应采取的质量控制措施进行讨论

培养基质量控制;微生物检测

培养基是是发酵过程或动植物细胞大量培养中供微生物或动、植物细胞的生长、繁殖或积累代谢产物，以合成生物化工产品所必需的营养基质。培养基的制备和使用是微生物实验室检测工作的重要环节。近些年来商品化的干燥培养基、成品培养基发展迅速，但由于该行业的生产工艺、设备还相对比较落后，质控手段也不够健全，市场监管又比较薄弱，这些都影响培养基的质量本文对微生物实验室在培养基购置、贮存、制备、使用等方面应采取的质量控制措施进行讨论，以便微生物实验室不断完善和提高培养基的质控水平。

1 培养基的购置与验收

1.1 购置 微生物检验用的各种药品、试剂和干粉培养基必须是专业厂家生产的产品，质量必须符合有关的质量标准，并且生产商应提供培养基的名称、产品编号、批号、各种成分和任何补充成分、培养基使用前的pH值、贮存资料及有效期等信息，以利于使用者对产品进行记录和比较。应选择产品市场信誉度高、有质量保证能力和服务保证能力的企业;企业是否通过了质量管理体系的认证是较为客观的评价指标。

1.2 验收 购买的培养基到货后，应有专人做好接受和验收工作，应仔细核对生产企业提供的资料、培养基名称、规格数量、外观特征、批号、保质期是否符合要求。每批培养基到货物后都应对培养基的质量进行检测，满足检测方法规定的要求后方可投入使用。

2 培养基的储存

干粉培养基应保存在阴凉干燥处，要避免阳光直射;未开瓶的培养基在室温下的最长保存2年，开瓶后的干粉培养基易吸湿，应注意防潮并在6个月内用完。应定期对储存中的培养基进行常规检查，如容器密闭性复查、首次开封日期、内容物的感官检查，如果培养基发生结块、颜色异常和其他变质迹象就不能再使用［1］。

3 培养基的制备

3.1 培养基用水 培养基制备用水应使用蒸馏水或与其同质的水，最好不使用离子交换器生产的去离子水。

3.2 称量 称量时要用专用的角匙，避免交叉污染而影响检验结果;干粉培养基易吸潮，如有条件，尽量在湿度较低的房间称取培养基。干粉培养基应严格按照生产商提供的有关说明准确配制。

3.3 复水 复水时不得用铜锅或铁锅，以防有离子混入培养基中，影响微生物的生长;容器的大小需大于复水后培养基总体积的2倍以上，避免在加热溶解过程中培养基溢出;含有琼脂粉的培养基，在加热溶解之前可以浸泡数分钟;加热培养基时一定要进行搅拌，特别是琼脂类培养基。为避免烧焦和沸腾溢出，对于少量的培养基最好使用沸水浴进行加热。烧糊的培养基营养物质被破坏，并可产生有毒物质，如发现焦化，或未溶解均匀前培养基有溢出，该培养基即不能使用，应重新制备。对于琼脂类培养基进行再融化时应使用沸水浴或流动蒸汽进行加热，最多只能加热两次，第二次再融化后仍未用完的培养基应弃去。

3.4 灭菌 培养基应按培养基配方中规定的条件及时进行灭菌，通常是121℃15 min，以保证灭菌效果和不损伤培养基的有效成份。已配制好的培养基必须立即灭菌，避免微生物生长繁殖而消耗养分，改变培养基的酸碱度。，因此必须严格控制灭菌温度和时间，并且不可重复灭菌。

3.5 pH测定 微生物必须在适宜的pH范围内才能正常生长繁殖或体现其生物特性。灭菌前后PH会有所变化，所以灭菌前就要准备好，可以用1 mol/L的NaOH或者1 mol/L的盐酸事先调高或调低。注意不可反复调pH，否则会影响培养基的渗透压。

3.6 配制好的培养基保存 灭菌以后培养基应该迅速冷却至所需温度，避免长时间保存在灭菌锅内造成过度灭菌，影响培养基的营养成分或选择性效果。建议平板倾注后立即使用。保存时，尽可能贮存在不会改变其成分的条件下，即避光或在4℃～12℃冰箱密闭保存。如果保存时间超过2 d，应将其放入密封的塑料袋中保存;配好的肉汤类培养基如果保存时间超过2个星期，应将其放在带有螺旋盖的试管或其他密闭的试管或容器中防止蒸发［2］。

4 培养基的性能测试

4.1 物理学控制 制备好的培养基应有相应的颜色，一般的培养基应澄清、无浑浊、无沉淀。使用前应检查培养基的颜色是否发生变化，是否蒸发/脱水。

4.2 污染控制 从每批制备好的培养基中选取部分进行污染测试(无菌试验)，确定无微生物生长方可使用。

5 讨论

培养基的质量是微生物实验室检测工作的基础，事关检测工作的准确性可靠性，在微生物实验室检测工作中举足轻重。如果在工作中忽视任何一个环节的质量问题，都将导致检验结果科学性、客观性的偏离。因此，加强培养基的实验室质量控制，认真地做好培养基的质控工作，不断完善和提高培养基的质控水平，才能为微生物检测实验室提供高质量的培养基。

［1］唐细良，史娟，唐紫琳，等.影响卫生微生物检验质量的两个因素研究.实用预防医学，2000，7(4):314-315.

［2］饶红，陈广全，冯骞，等.微生物实验室培养基的质量保证措施.检验检疫科学，2006，6(4):31-33.

256100山东省淄博市沂源县疾病预防控制中心