陈 文，王湘君，赵 阳，陈启芳

(1.琼州学院理工学院，海南五指山572200;2.琼州学院生物科学与技术学院，海南五指山572200;3.河南省新乡市环境监测站，河南新乡453002)

0 引言

海南省五指山苦丁茶属冬青科的两个种，即冬青科冬青属大叶冬青和冬青科冬青属苦丁茶［1］。文章通过测定苦丁茶黄酮含量，发现黄酮是苦丁茶的重要组成成分。在一定范围内，随着黄酮含量的增多，其产生的药理作用对人体有益效果更加明显［2］。

1 实验研究

实验研究以不同等级海南五指山苦丁茶为原料，采用醇提法对苦丁茶样品进行初处理;根据黄酮类物质与金属铝离子结合显黄色，并在465nm波长下有最大吸收这一特征反应;利用紫外可见分光光度法与芦丁标准系列定量比较，通过标准曲线得出公式，计算样品中黄酮含量。将实验测量结果与国内其它地区苦丁茶相应物质含量比较，发现五指山苦丁茶黄酮含量较高。

1.1 五指山苦丁茶中黄酮类物质含量测定

1.1.1 材料、设备与试剂

1.1.1.1 苦丁茶样品样品均来自海南五指山山脉(海拔约为1860m)采摘的苦丁茶(晒干)。

高级苦丁茶:一级苦丁茶，肥壮，乌润，匀净，无花杂，价格适中。

低级苦丁茶:二级苦丁茶，褐黑，较匀净，少量花杂，稍有嫩茎，经济实惠。

1.1.1.2 主要仪器设备TU－1901紫外－可见分光光度计:北京普析通用仪器有限责任公司

蒸馏装置:M22型中量有机制备仪

电子天平:上海恒平科学仪器有限公司

电子分析天平:赛多利斯科学仪器(北京)有限公司

电子调温电热套:天津市泰斯特仪器有限公司

电子万用炉:天津市泰斯特仪器有限公司

容量瓶:10mL，100mL，250mL，1000mL

吸量管:0.5mL，2mL，5mL，10mL

1.1.1.3 主要试剂(1)芦丁标准品:称取0.25g芦丁粉末，用甲醇溶解配制成0.25mg/mL溶液。(2)5%亚硝酸钠:称取0.5g亚硝酸钠固体，加入蒸馏水9.5mL配制成溶液。(3)5%硝酸铝:称取0.5g硝酸铝固体，加入蒸馏水9.5mL配制成溶液。(4)4%氢氧化钠:称取4.0g氢氧化钠固体，加入蒸馏水96mL配制成溶液。

(5)甲醇和95%乙醇:市售

1.1.2 实验方法

1.1.2.1 苦丁茶黄酮样品液制备将新鲜的苦丁茶叶经粉碎机粉碎，用电子天平准确称取10.0g粉末，用滤纸包好，装入索氏提取器中，包好的滤纸紧贴器壁，上端呈凹状，高度低于虹吸管最大高度，烧瓶内加入125mL甲醇，水浴加热抽提2－3小时，直到抽提液颜色变浅。得到深绿色的提取液，溶液水浴加热浓缩约至100mL，转入100mL容量瓶用甲醇定容，备用。

1.1.2.2 标准溶液的配制准确称取干燥至恒重的芦丁标准品0.25g，用甲醇溶解后转入于1000mL容量瓶中，并定容至刻度，得浓度为0.25mg/mL标准贮备液，装入棕色瓶中冰箱保存备用。

1.1.2.3 标准曲线的绘制准确吸取 0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL 芦丁标准溶液于 25mL 已编号比色管中，依次加入0.3mL 5%亚硝酸钠溶液，0.3mL 5%硝酸铝溶液，4mL 4%氢氧化钠溶液，以甲醇溶液定容至10mL，静置15min，多次测量取平均值。

1.1.2.4 最佳波长的选择取标准待测液(第4支比色管)在TU－1901紫外－可见分光光度计上，300－550nm波长范围内进行光谱扫描，取最大吸收波长为检测波长，最后得到465nm处吸收最大。

1.1.2.5 待测样品的准备取1mL样品提取液用甲醇稀释至10mL，再取其中1mL于10mL比色管中，依次加入0.3mL 5%亚硝酸钠溶液、0.3mL 5%硝酸铝溶液、4mL 4%氢氧化钠溶液，以甲醇溶液定容至10mL，静置15min，重复测量3次。

1.1.3 实验数据与结果

1.1.3.1 实验数据及标准曲线绘制

表1 芦丁标准品标准曲线实验数据

图1 芦丁标准品溶液吸光度曲线图Figure1 rutin standard solution absorbance curve

1.1.3.2 苦丁茶样品液实验数据

表2 苦丁茶样品液实验数据

1.1.3.3 实验数据结果分析

计算公式:①吸光度值代入公式:

求得到测量样液浓度C

②含量计算公式:

表3 苦丁茶黄酮含量结果

不同等级的海南五指山苦丁茶黄酮含量不一样，经计算低级苦丁茶和高级苦丁茶黄酮含量分别为2.204%和2.282%，高级苦丁茶黄酮含量较丰富，但整体含量相差不大;通过实验数据发现，黄酮类物质在苦丁茶中所占分量较高，是苦丁茶的重要组成部分之一。

2 实验结果讨论与分析

2.1 与国内其他地区不同等级苦丁茶物质含量比较

表4 国内不同等级苦丁茶中黄酮和咖啡因含量

综上，黄酮类物质在苦丁茶中的含量比重相对较高。长江中下游地区黄酮类比重相对较低，而海南五指山的含量相对较高，相对有些地区苦丁茶中黄酮类物质含量高出近18%［3］。

2.2 实验结果分析实验采用的原料是不同等级的海南五指山苦丁茶，由于苦丁茶的等级级别较少并且等级级数相差不大，测量结果数据显示相差不明显;实验结果通过TU－1901型紫外可见分光光度计测得，测量时采用多次平行测定，准确度相对较高。由于受环境如光照、温度等条件影响较大，测量结果存在着一定的误差，但仍具有参考价值。

3 黄酮类物质药用价值

苦丁茶的药疗功效需要长期饮用后才能有较明显效果。据《本草纲目》记载，苦丁茶具有散热、清目、生津、止渴、消食、提神、消炎、解毒、降压、降脂等药理功能［4］。黄酮广泛存在于自然界植物和浆果中，4千多种，其分子结构不尽相同，不同分子结构的黄酮可作用于身体不同的器官。苦丁茶中黄酮的种类和结构也多样，了解其药用价值对苦丁茶的深入认识奠定了基础。黄酮的功效是多方面的，作为一种很强的抗氧剂，可有效清除体内的氧自由基，阻止细胞的退化、衰老，也可抑制癌症的发生［5］;黄酮可改善血液循环，降低胆固醇，降低心脑血管疾病的发病率;黄酮还有降低血糖的功效，因为其具有稳定胶原质的作用，对糖尿病引起的视网膜病及毛细血管脆化有很好的保护作用;黄酮还可抑制炎性生物酶的渗出，增进伤口愈合和止痛，由于具有抗组织胺性，可用于各类敏感症［6］。总之，黄酮类物质可以帮助人体改善血液循环，提高免疫力，降低血压、抑制癌症、抗击衰老等多种药疗功效，是糖尿病、高血脂、高血压患者的福音［7］。

4 结论

苦丁茶是天然保健绿色食品，有较好的药用价值。海南五指山地区四季如春，独特的气候对种植苦丁茶可以提供优越的环境，对实现海南五指山苦丁茶产业化，市场化具有重要意义。海南五指山不同等级苦丁茶中黄酮类物质含量为2.204%至2.282%，相对国内其它地区有较强的竞争优势，这对五指山苦丁茶发展研究提供科学的参考价值。目前，国家正在大力发展海南国际旅游岛，应合理利用发展契机，开发五指山苦丁茶产业如饮料等新产品，具备良好的发展前景，促使苦丁茶行业迅猛发展。

［1］吴晔.苦丁茶的生化成分与保健功能［J］.现代农业科技，2011(10):351－352.

［2］孙怡，张鑫，张文芹.苦丁茶冬青苦丁茶中多酚类物质的分离纯化与结构解析［J］.食品科学，2011，32(11):60－63.

［3］沈强，司辉清，于洋.苦丁茶化学成分研究进展［J］.茶业通报，2010，32(1):21－24.

［4］刘宗岸.冬青属苦丁茶的保健功效及利用［J］.热带农业科技，2009，32(2):26－28.

［5］古小玲，李达敏.海南茶产业发展概况［N］.海南日报，2008－03－18.

［6］王新雯，海洪，金文英.黄酮类化合物含量测定方法的研究进展［J］.辽宁化工，2008，37(12):858－860.

［7］石秀梅，邹辉.茶类产品总黄酮类化合物测定方法研究概况［J］.蚕桑茶叶通讯，2008(4):33－34.