王帅，孟宪生，包永睿，郭小瑞

(辽宁中医药大学药学院，大连 116600)

北柴胡(Bupleurum chinense Dc.)为伞形科柴胡属植物，是药用柴胡的主要来源之一。其性微寒，味苦，具有和表解里、疏肝、升阳举陷的功效，为中医治疗少阳证的首选药物［1］。其所含主要有效成分为柴胡皂苷，具有保肝利胆、抗炎、镇痛、抗溃疡、抗菌、抗病毒、抗细菌内毒素等作用［2-3］。采用大孔吸附树脂等技术对柴胡总皂苷类成分进行富集纯化已有文献报道，但均采用单一树脂，且洗脱率不高。笔者采用树脂联用技术纯化柴胡总皂苷，既可实现较高的洗脱率，又可保证较高的纯度。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1100 Series高效液相色谱仪(配有DAD、自动进样器)，Chem Station(Agilent科技有限公司)，UV-1800紫外分光光度计(北京瑞利分析仪器公司)，CP225D型电子天平(德国Saritorius集团)。

1.2 试药 柴胡皂苷A、D对照品(四川维克奇生物科技有限公司，批号:090312，090114)，柴胡药材(辽宁本溪三药有限公司提供，经辽宁中医药大学翟延君教授鉴定为 Bupleurum chinense DC.)，大孔吸附与离子交换树脂 HPD-300、HPD-400、HPD-600、D101、AB-8、NKA、NKA-9、D900(沧州宝恩化工有限公司)，其他化学试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 高效液相色谱法

2.1.1 色谱条件 色谱柱:Phenomenex C18(4.6 mm×250 mm，5μm);流动相:乙腈(A)-水(B);洗脱梯度(0～26 min:A 30%→42%;～40 min:A 42%);流速:1.0 mL·min-1;柱温:25℃;检测波长:210 nm。

2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取柴胡皂苷A 2.63 mg，柴胡皂苷 D 2.26 mg，置于 10 mL 量瓶中，加甲醇适量，超声使溶解，再用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.1.3 标准曲线的绘制 精密量取柴胡皂苷A、D混合对照品溶液6，10，14，18，22，26，30 μL，按上述色谱条件进样测定，以峰面积的自然对数为纵坐标，柴胡皂苷A(D)量的自然对数为横坐标，绘制标准曲线，柴胡皂苷A 的回归方程分别为:Y=93.624X －37.177，r=0.999 6;柴胡皂苷 D:Y=68.734X+38.675，r=0.999 1。……