杨开杰

(邢台广播电视大学理工系,河北邢台 054000)

苏云金芽孢杆菌晶体蛋白分离纯化新方法研究

杨开杰

(邢台广播电视大学理工系,河北邢台 054000)

分离苏云金芽孢杆菌(Bt)晶体蛋白常用的方法有液体双相法、密度梯度法、沉淀法、生物-物理分离法等,但这几种方法各有优缺点。从分离成本、仪器设备、纯度、产量、活性等方面考虑,在超声波处理、悬液制备和紫外线辐射3个方面进行了改进,提出了一种新的分离Bt晶体蛋白的方法,产品纯度可达90%以上,产率从原来的20%提高到28%。本方法成本低,产率高,操作简单,具有很强的实用价值。

苏云金芽孢杆菌;分离纯化;晶体蛋白

苏云金芽孢杆菌(bacillus thuringiensis,Bt)是一种绿色生物农药,属于微生物杀虫剂,其有效杀虫成分是伴孢晶体和芽孢。由于Bt具有对病虫害防治效果好、对人畜安全无毒、不污染环境、不杀害天敌等优良品质而倍受青睐,全世界年产值已突破1亿美元,并且以每年10%～20%的速度上升[1]。为了更深刻地了解Bt农药的杀虫机理及其基因表达,从Bt中分离纯化有效成分伴孢晶体则十分重要[2]。目前常用的分离纯化方法有双相法、密度梯度法、沉淀法、生物-物理分离法,这些方法在晶体蛋白的质量和产量、实验的重复性等方面各有优缺点。常用的四氯化碳-硫酸钠双相法尽管产量比较高,所用试剂价廉,仪器简单,但纯度不够,试剂毒性比较大,操作不方便。密度梯度法常用的是泛影葡胺梯度离心法,能获得纯度较高的晶体,但产量较低,试剂及实验条件要求比较严格。……