吴玉臣,郭 爽,杨国宇

(1.郑州牧业工程高等专科学校动物医学系,河南郑州450011;2.河南农业大学牧医工程学院,河南郑州450002)

随着社会的发展和人们生活水平的提高,越来越多的人关注食品卫生与安全。这也要求畜牧业在发展的过程中必须少加或不加抗生素,以减少其残留对人的危害。许多学者认为中草药可以提高机体的抵抗力,抵抗多种细菌和病毒的攻击。现已证实某些中草药的疗效与其抗氧化作用密切相关。已发现的植物药抗氧化成分有黄酮类、皂苷类、多糖类、有机酸类、萜烯等,这些物质通过清除人体内自由基,还原氧化物质,从而达到保护机体的作用。

本试验中药选择以清热解毒、抗菌消炎、扶正祛邪、促进机体免疫功能为原则,分别选用炙黄芪、当归 、何首乌 、淫羊藿 、扁豆 、黄柏 、穿心莲 、附子 、炙甘草,水煎熬后饮水,研究其对艾维茵肉鸡抗氧化功能的影响。

1 材料与方法

1.1 中药的制备 中药配方：炙黄芪200 g、当归160 g、何首乌120 g、淫羊藿120 g、扁豆100 g、黄柏20 g、穿心莲 20 g、附子 160 g、炙甘草100 g。将上述配方按常规煎熬方法用水分两次熬成1 000mL药液,置于4℃冰箱中备用。

1.2 试验动物与分组 选1日龄艾维茵肉鸡400羽,由河南农业大学种鸡场提供。将试验鸡随机分为4组,每组 25羽,试验组三组,对照组一组,每组设4个重复。

1.3 试验动物的处理 试验肉鸡的饲养按正常标准进行饲喂,自由饮水。试验组肉鸡的饮水中分别加入3个不同剂量的复方中药液,分别为高剂量组(1 500 mL/t),中剂量组(1 000 mL/t),低剂量组(500mL/t);对照组正常饮水。各组在1、10、20、30 d和40 d无菌采血,分离血浆,冷藏保存。

1.4 测定指标

1.4.1 总SOD活性检测 总SOD活性检测采用总SOD活性检测试剂盒(NBT法)进行测定。试剂盒购自碧云天生物技术研究所。测定样品来自于1.3所采的无菌血。样品测定参考表1.使用96孔设置样品孔和各种空白对照孔。按表1依次加入待测样品和其他各种溶液。加入酶工作液后充分混匀。37℃孵育20 min～30 min,在 560 nm 测定其吸光度。样品中总SOD活性的计算公式如下：

待测样品中SOD活力(units)=抑制百分率/(1-抑制百分率)×稀释倍数。(当抑制率为50%时SOD酶活力单位为1 units)。抑制百分率=[(A空白对照1-A空白对照2)-(A样品 -A空白对照3)]/(A空白对照1-A空白对照2)×100%。如果计算出的抑制百分率大于70%或小于30%,则需要把该样品重新测定。结果偏高,稀释样品,结果偏低,则需要重新准备浓度较高的待测样品。

表1 样品测定操作方法

1.4.2 总抗氧化能力检测 总抗氧化能力检测用试剂盒(FRAP法)进行检测,试剂盒购自碧云天生物技术研究所。测定样品来自于1.3所采的无菌血。样品测定步骤如下：(1)96孔板的每个检测孔中加200μL FRAP工作液。(2)空白对照孔中加入5μL蒸馏水;标准曲线孔加入5μL各种浓度的FeSO4标准溶液;样品检测孔内加入5μL各种样品,轻轻混匀。(3)37℃孵育3～5 min后在 585～605 nm范围内测定其OD值。(4)根据标准曲线计算出样品的总抗氧化能力。如果测定出的OD值在标准曲线外,则需把样品适当稀释后再进行测定。(5)总抗氧化能力表示方式：对于FRAP法,总抗氧化能力用FeSO4标准溶液浓度来表示。例如某血浆样品测定获得的吸光度和1mmol/L FeSO4标准溶液的吸光度相同,则该血浆样品的总抗氧化能力为1mmol/L。

2 结果

2.1 抗氧化能力测定

2.1.1 用总SOD活性检测试剂盒(NBT法)检测样品中的SOD活性值,结果见表2。

由表2可以看出,试验鸡10 d时,对照组与试验各组SOD活性值差异显著(P＜0.05),各试验组间差异不显著(P＞0.05);20、30、40 d时对照组与试验组间SOD活性值差异极显著(P＜0.01),各试验组间差异不显著(P＞0.05)。

2.1.2 用总抗氧化能力检测试剂盒(FRAP法)测定的血液中总抗氧化能力值,结果见表3。

表2 复方中药对血清中SOD活性值的影响 (units)

表中同列数据肩标字母相同者表示差异不显著(P＞0.05),字母相邻者表示差异显著(P＜0.05),字母相同者表示差异极显著(P＜0.01)。下表同

表3 复方中药对血液总抗氧化能力的影响 (mmol/L)

由表3可以看出,10 d、20 d试验肉鸡,其血液中总抗氧化能力对照组显著低于低剂量组(P＜0.05),极显著低于中剂量和低剂量组(P＜0.01),中剂量组和高剂量组间差异不显著(P＞0.05);30 d、40 d试验肉鸡其血液中总抗氧化能力极显著低于各试验组(P＜0.01),各试验组间差异不显著(P＞0.05)。

3 分析与讨论

机体抗氧化能力的强弱表明了机体的健康状态,抗氧化能力越强,机体越健康。本研究表明,饮水中添加复方中药后,可显著或极显著提高肉仔鸡的SOD活性,显著或极显著提高肉仔鸡血液中的总抗氧化能力,从而说明饮用复方中药后可显著或极显著提高机体肉仔鸡的抗氧化能力,提高机体的抗病能力。邹永新等(2009)以蜂胶、黄芪、扶芳藤等按一定工艺研制成复合中药佐剂制成疫苗接种鸽后检测SOD活性,结果表明,复合中药免疫佐剂试验鸽的SOD活性均显著高于不添加任何制剂的对照鸽[1]。吴青等(2006)研究表明,淫羊藿等15种中药用DPPH法和FRAP法检测,不同中草药显示出不同的抗氧化活性。其中淫羊藿具有较强的抗氧化活性[2]。陈会良等(2006)研究表明,在饲料日粮中添加1%杜仲叶、紫苏叶、黄芪、淫羊藿复合物,试验组血清SOD活性显著高于对照组[3]。武晋孝等(2002)研究表明,淫羊藿、首乌等中药可显著提高血清中SOD活性[4]。以上研究所用组方中药和本研究所用组方中药都有重复,研究结果也和本研究结果相似,说明某些中药确能提高机体抗氧化能力。

4 结语

自拟复方中药可显著提高机体的抗氧化能力,提高机体的抗病能力。中剂量(1 000mL/t)为最适合添加量。

[1] 邹永新,肖智远,李利娜,等.复合中药佐剂的制备及其对鸽SOD活性影响[J].广东农业科学,2009(2)：79-81.

[2] 吴青,黄娟,罗兰欣.15种中草药提取物抗氧化活性的研究[J].中国食品学报,2006,6(1)：284-289.

[3] 陈会良,蔡汉乔.草药添加剂对肉鸡抗氧化能力和红细胞免疫功能的影响[J].中国饲料,2006(3)：17-18.

[4] 武晋孝,李淑琴,王俊东,等.不同中药组方对肉鸡抗氧化作用的影响[J].中国畜牧杂志,2002,38(5)：24-25.