段博芳,沈艳萍,杨贵树,张 飞,吴静敏,段 纲,尹革芬*

(1.云南农业大学动物科学技术学院,云南昆明 650201;2.振太畜牧兽医站,云南镇沅 666508)

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine productive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸衰竭为主要症状的传染病,临床症状主要表现为母猪流产、早产、产死胎、产木乃伊胎、仔猪成活率下降和育成猪呼吸道症状等[1]。PPRS于1987年在美国北卡罗来纳州首先发现[2],随后在荷兰、加拿大、德州、英国、西班牙、瑞士、法国等世界许多国家和地区均有发生[3]。1991年Wensvoort G等[4]用猪巨噬细胞(PAM)从发病猪群中分离到PRRSV(欧洲型)。1996年郭宝清等[5]用 PAM 和Marc-145细胞首次从国内发病猪群中分离出PRRSV,随后我国的许多省都相继用肺泡巨噬细胞(pulmonary alveolar macrophage,PAM)和Marc-145细胞分离到PRRSV毒株。自2007年以来,我国有26个省份先后发生了高致病性PRRS疫情,对我国的养猪业造成了极大的危害和重大的经济损失,严重影响了农民的增收和猪肉消费市场的稳定以及养猪业的生产安全。2007年杨贵树等对云南省某些猪场PRRS血清流行病调查表明 PRRS血清阳性率为90.8%[6]。表明PRRS已经在云南省存在,本试验从云南某猪场送检样品(病死猪肺)中分离出一株疑是PRRSV,并对其进行初步鉴定。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料来源 云南某猪场送检样品,经 RTPCR初步检测为PRRSV阳性。

1.1.2 细胞及相关试剂 Marc-145细胞由云南农业大学动物科学技术学院动物医学实验室保存;原代PAM细胞为自行分离;MEM粉剂(GIBiCO);1640细胞培养液(GIBCO);标准胎牛血清,天津濒洋生物公司产口;双抗,美国GIBCO公司;胰酶粉,T ryPSIn:1:250,华美生物工程公司产品;血样(液体样本)RNA提取试剂盒,百泰克生物有限公司产品;反转录试剂盒,TaKaRa公司。……