程家林,李国清,岳彩铃,徐前明,高振永,刘 霞

(华南农业大学兽医学院,广东广州 510642)

环孢子虫(Cyclospora sp.)是一种新出现的食源性和水源性传播的寄生原虫,可以引起人和动物的胃肠炎和严重腹泻[1-5]。1996年-1999年美国和加拿大相继暴发了大规模的食源性环孢子虫病[1,6],由此该寄生虫引起医学界和国家公共卫生机构的广泛关注。大量研究证实环孢子虫隶属于复顶门、孢子虫纲、真球虫目、艾美耳科、环孢子虫属(Cyclospora)。迄今为止,已报道的环孢子虫大约有18种[7-8],它们大都寄生于哺乳类与爬行类,分别为C.cayetanensis、C.cercopitheci、C.colobi、C.papionis、C.angimurinensis、C.ashtabulensis、C.b abaulti、C.caryolytica 、C.glomericola 、C.megacephali、C.niniae、C.parascalopi、C.scinci、C.talpea 、C.tropidonoti、C.viperae、C.zamenis 和牛源环 孢子 虫 。由于各种环孢子虫的形态学特征基本相似,并容易与其他球虫相混,要确定环孢子虫的种类,必需对其进行分子生物学鉴定。目前对环孢子虫的分子鉴定方法国际上多采用Relman D A等[9]设计的套式引物,扩增18 S rDNA基因的294 bp片段,随后进行RFLP研究或对其克隆测序结果进行序列分析[10],来确立环孢子虫属的分类地位;扩增环孢子虫种间高度特异的转录间隔区Ⅰ(internal transcribed spacer 1,ITS-1)基因片段,来确立环孢子虫种的分类地位。迄今为止,通过分子生物学研究鉴定出的环孢子虫有 5种[7-9],分别为 C.cayetanensis、C.cercopitheci、C.colobi、C.papionis和牛源环孢子虫。本研究首次在鸭粪中发现了疑似环孢子虫卵囊,并综合应用形态学和分子生物学鉴定方法对其进行分类研究,以确立鸭源环孢子虫的分类地位。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 卵囊的收集 从广东省佛山某鸭场采集新鲜鸭粪,先加少量水稀释,镜检发现有疑似环孢子虫卵囊时,再用多于10倍体积的……