何世成,刘道新,张 志,鲁杏华,吴发兴,邹 敏,谈志祥,郭成玲,张燕霞

(1.湖南省动物疫病预防控制中心,湖南长沙 410007;2.中国动物卫生与流行病学中心,山东青岛 266034;3.湖南省动物卫生监督所,湖南长沙 410007)

猪猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)是圆环病毒科圆环病毒属的成员,是导致断乳后仔猪多系统衰竭综合症(Post-weaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)的主要病原[1]。自1997年加拿大首次报道[2]以来,已在许多国家出现感染和流行。1999年朗洪武在北京、河北等地猪场中首次检测到猪圆环病毒2型在我国的存在[3],此后国内许多实验室也相继检测、分离到该病毒,并进行很多相关研究[4-6]。

根据PCV致病性和核酸序列的不同,猪圆环病毒可分为PCV-1和PCV-2,PCV-1认为是PK-15细胞培养的污染物,无致病性,基因组全长1 759 bp,而PCV-2却具有致病性,并已认为PCV-2是PMWS的主要病原,其基因组全长1 767 bp(或1 768 bp),PCV-1与PCV-2型内同源性都在90%以上,但两型间的同源性小于80%[7]。目前,PCV-2基因组序列相对稳定,但分离自不同地区的毒株会有一定的差异。从湖南省2003年-2008年疑似PMWS病死猪组织中分离到7株PCV-2,并进行了全基因测序和遗传进化分析,对湖南省6年来的PCV-2分子流行病学进行了研究。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料与试剂 病料为2003年-2008年湖南省内疑似PMWS病死猪的组织(包括肺与淋巴结)。PK-15细胞、宿主菌 TG-1由农业部动物检疫所流行病研究中心实验室提供;pMD 18-T Vector、r Taq 、dNTPs、DNA Marker、氨苄青霉素(Amp)、DNA胶纯化回收试剂盒购自宝生物工程(大连)有限公司。DNAzol Reagent为Invitrogen公司产品。HindⅢ、Bam HⅠ内切酶购自Promega公司。

1.1.2 引物 参考GenBank 2003年上海PCV2分离株全基因组序列(AY291318),利用DNA Star软件包中的Primer Select软件进行引物设计。

引物 1:5′-AACCTTAACCT T TCT TAT TC-3′

引……